RNeasy FFPE Kit

技术参数

特点	参数
应用	PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
洗脱体积	14–30 µl
规格	Spin column
主要样本类型	FFPE tissue samples
处理	Manual (centrifugation), automated (QIAcube)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白	RNA
样本量	1*5 µm to 4*10µm sections
技术	Silica technology
每次运行或制备时间	70 minutes
产量	Varies

性能 使用RNeasy FFPE Kit从固定和包埋的样本中纯化获得的RNA的产量比用其他方法更高（参见Greater yields of RNA）。回收得到的完整RNA最小可达70 nt，并且几乎没有基因组DNA的污染（参见Recovery of all usable RNA）。用该试剂盒从FFPE样本中纯化得到的RNA片段非常适用于real-time RT-PCR等敏感的下游应用（参见Reliable results in real-time RT-PCR analysis和Successful real-time RT-PCR analysis）。 原理

用福尔马林固定组织会导致RNA-RNA和RNA-蛋白质的交联，这会影响RNA在酶学分析中的性能。FFPE样本固定和包埋同样会导致核酸的严重片段化。RNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件来逆转福尔马林对RNA的修饰。裂解缓冲液能使RNA从FFPE组织样本中有效释放，并防止进一步的RNA降解。经优化的条件能纯化得到所有可用的RNA，使用RNeasy FFPE Kit从FFPE样本中得到的RNA的产量比其他方法更高。

操作流程

整个RNeasy FFPE操作流程可在85分钟内完成（参见RNeasy FFPE procedure）。使用蛋白酶K裂解样本仅需15分钟。裂解后，样本在80ºC下孵育15分钟。之后，用DNase处理能有效去除样本中的基因组DNA，包括小的DNA片段。最后，使用RNeasy MinElute离心柱即可收集纯化的RNA，洗脱体积14–30 µl。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。

应用

RNeasy FFPE Kit可纯化FFPE 样本中所有大于70 nt RNA，得到适用于RT-PCR等众多下游应用的RNA片段。但是，从FFPE样本中纯化得到的RNA会严重片段化，不能用于需要完整RNA的下游应用。如果使用片段化RNA可能需要做些修饰（例如在RT-PCR时设计小的扩增子）。进行cDNA合成时，不能使用oligo-dT引物，而要使用随机或基因特异性引物。