启动子文库工作菌液

▼ 产品简介

本产品由长度为7 bp的启动子片段和pHIS2 （Smal-lineared）载体同源重组构建文库质粒，含有多个克隆位点和限制性内切酶，可用TF centered Y1H筛库，筛选与转录因子互作的核心位点。

 

▼ 产品规格

名称	货号	组成成分	规格
启动子文库工作菌液	RY8006	启动子文库酵母工作菌液	4ml（4支，1ml/支）
		说明书	份，纸质版

 
▼ 保存条件

-80℃~-70℃保存，运输条件：干冰。

▼ 产品标准

文库库容量>1*108

重组率>95%

空载率<5%
 

▼ 产品优势

 

▼ 载体信息

▼ 实验指南

用含有pHIS2-启动子质粒的酵母工作菌液制备感受态，将pGADT7-诱饵质粒DNA转入其中，涂相应的筛选平板。

1. 冰上融化启动子文库酵母工作菌液，接于液体SD-T培养基50 ml，30℃，225 rpm，振荡培养24 h。

2. 转接于YPDA液体500 ml，使初始OD600=0.2，30℃，225 rpm，振荡培养4-5 h，至OD600=0.6。

3.离心收菌，室温，4000 rpm，5 min。

4.用30 ml无菌水重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm，5 min，弃上清。

5.用20 ml 0.1M LiAc重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm，5 min，弃上清。

6.用10 ml 0.1M LiAc重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm ，5 min，弃上清。

7.向离心管中依次加入如下试剂，用枪头吹打混匀，或剧烈振荡1 min左右，至完全混匀。

50%PEG3350	1 M LiAc	ssDNA (10 mg/ml)	诱饵质粒DNA
9.6 ml	1.44 ml	300 ul	25 ug

8. 30℃水浴孵育，30 min。

9. 42℃水浴热激，25 min。

10. 30℃水浴复苏1 h。

11.离心收菌，室温，4000 rpm ，5 min，弃上清，用6 ml无菌水重悬菌体，尽量温和地混匀，从中取20 ul培养物稀释后涂SD-TL平板，用于检测文库转化效率。其余涂相应的平板20块。

12. 30℃恒温培养3-7天，观察菌落生长。

13. 挑取长出的克隆单菌落，转接到相对应的筛选平板中继续培养3-5天。

▼ 案例展示

▼ 注意事项

启动子文库酵母工作菌液避免反复冻融，使用时请在冰上解冻。
 

▼ 技术支持

本公司产品使用过程中如有任何疑问与建议，欢迎随时与我们联系：market@bestofbest.top