牛痘病毒加帽体系利用牛痘病毒加帽酶及相关组分,将 7-甲基鸟苷帽结构(m7Gppp,Cap0)加到 RNA 的 5´ 末端。在真核生物中,该结构与 mRNA 的稳定、转运和翻译密切相关。使用酶促反应为 RNA 加帽是一种简单有效的方法,且帽结构与天然 Cap 0 结构完全一致,能显著改善用于体外转录、转染和显微注射的 RNA 的稳定性和翻译能力。这种酶由两个亚基(D1 和 D12)组成,D1 亚基执行 RNA 三磷酸酶和鸟苷转移酶的功能,D12 亚基执行鸟嘌呤甲基转移酶的功能,它们对于添加一个完整的 Cap 0 结构 m7Gppp5´N 都是必须的。由牛痘病毒加帽酶构建的带帽 RNA 产品具有“Cap 0”结构。通过在加帽反应中同时使用 mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶和牛痘病毒加帽酶,Cap 0-RNA 可以转化为“ Cap 1”结构。 mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶通过将甲基从供体分子 SAM 转移到 Cap 0- RNA 5’端紧邻帽结构的第一个核苷酸的 2'-O 位置,从而从 Cap 0-RNA 制备 Cap 1-RNA。 本制品Vaccinia Capping System包含牛痘病毒加帽酶和其他加帽反应所需组分,可用于T7 RNA Polymerase 催化的体外转录反应产生的RNA的加帽反应。
【产品信息】
组分 | 体积 |
10x Capping Buffer | 1mL |
10mM GTP | 1 mL |
32 mM SAM | 250 μL |
Vacciniacapping enzyme(10U/μL) | 500 μL |
Cap 2’-O-Methyltransferase(50U/μL) | 500 μL |
RNase Inhibitor (40U/μL) | 250 μL |
RNase-free water | 10 mL |
【储存条件】 -20℃保存,≤0℃运输。
【适用范围】 体内或体外翻译前mRNA的加帽反应和5'末端标记反应。