NEB 快易无缝克隆预混液

快易无缝克隆预混液⸺ 超高质价比的无缝克隆工具

NEB中国重磅推出无缝克隆神器快易无缝克隆预混液（NEB #M5522）,15分钟搞定克隆助您轻松告别繁琐操作，让您的灵感即刻转化为成果，赢得科研先机！

NEB 无缝克隆神器首.发礼｜买 1 送 1！单反应低至 ￥9.9

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具体优惠如下：

 产品介绍NEB 中国已新推出超高质价比的无缝克隆工具⸺快易无缝克隆预混液。该产品可在等温条件下，通过一管式反应，快速高效组装 2-3 个带有重叠末端的 DNA 片段。仅需 15 分钟，即可完成无缝克隆，大幅提升实验效率。 NEB 快易无缝克隆预混液核心优势● 超快速度 ：15 分钟完成 2 - 3 个片段无缝克隆，快速呈现实验结果。●  零纯化步骤 ：省去繁琐纯化流程，降低操作失误风险，节省试剂成本。● 大片段兼容 ：支持长达 20 kb 插入片段，满足多样实验需求。● 灵活设计 ：自由定制序列，不依赖限制性位点，实验设计更灵活。● 广泛适用 ：适用于质粒构建、基因合成、定点突变等多种实验场景。*如需组装更多片段，请根据产品说明书进行实验优化 产品原理

快易无缝克隆预混液基于Gibson Assembly原理开发，可突破DNA片段长度及末端匹配性限制，实现多片段高效组装。对于较大的 DNA 构建体而言，该方法易用、灵活、适用性强，因此已被合成生物学领域广泛采用。
快易无缝克隆预混液可在等温条件下，通过一管式反应，快速高效组装2-3个带有重叠末端的DNA片段。

快易无缝克隆预混液在同一反应缓冲液中有三种不同的酶活性（1,2)：

• 核酸外切酶活性会产生单链 3´ 突出末端，促使互补的末端重复序列（重叠区）退火。
• 聚合酶活性会填补退火片段的缺口。
• DNA 连接酶活性能在组装后的 DNA 切刻处进行连接。

反应最终形成的双链闭合的 DNA 分子，可作为 PCR、RCA或其它分子生物学应用的模板，这些应用包括直接转化。经实验验证，该方法可成功用于寡核苷酸组装、不同重叠区域（15–80 bp）的DNA片段组装以及长达数百 kb的片段组装（1–2）。

 

 本产品提供以下试剂或组分：

• 优势和特性

  Features

  • 灵活的序列设计方案（重组克隆）
  • 无需PCR纯化步骤
  • 15分钟内快速完成DNA组装
  • 组装产物可直接用于转化，或作为 PCR 或 RCA 的模板
  • 适用于多种 DNA 改造，包括定点突变
  • 对长达 20 kb 的插入片段仍可高效完成转化
    
    

• 注意事项

  1. 一般说明：
     强烈建议使用我们的在线工具 NEBuilder™ 来设计 PCR 引物，使其在相邻 DNA 片段之间具有重叠序列，以将其组装到克隆载体。
  2. 使用说明：
     为确保成功组装以及后续成功转化组装的 DNA，NEB 建议遵循以下做法：
     
     
     • 细胞：感受态细胞的转化效率可能相差几个数量级。观察到的组装效率与用于转化的感受态细胞效率直接相关。
     • 电转化：电转化可以将转化效率提高几个数量级。将快易无缝克隆预混液产品用于电转化时，需要将反应液稀释 3 倍，并取 1 μl 用于转化。
     • DNA：如果快易无缝克隆反应液中所有 PCR 产物的总体积不超过快易无缝克隆反应体积的 20%，无需进行 PCR 产物纯化。PCR 产物体积过多会引入更多 PCR 产物中存在的 PCR 反应缓冲液和未使用的引物，从而降低快易无缝克隆和转化的效率。PCR 产物柱纯化可能会使快易无缝克隆和转化的效率增加 2 – 10 倍，在组装三个或更多 PCR 片段时，或组装长度超过 5 kb 的片段时，强烈建议进行 PCR 产物柱纯化。用于组装的纯化 DNA 可溶于 ddH₂O（推荐使用 Milli-Q® 水或同等纯度的水）、TE 或其它稀释缓冲液。
     • 插入片段：直接将片段组装到克隆载体中时，组装片段的浓度应比载体浓度高至少 2–3 倍。组装三个或更多片段时，建议使用等摩尔比的片段。
     • 生物学特性：一些 DNA 结构，包括反向重复序列和串联重复序列，会被大肠杆菌选择性丢失。大肠杆菌无法耐受某些重组蛋白，因此可能会导致转化效率较低或菌落较小。

  参考文献

  1、Gibson, D.G. et.al (2009). NatureMethods. 343-345.

  2、Gibson, D.G. et.al (2010). NatureMethods. 901-903.