Poly(A) Polymerase

 

产品描述：Poly(A) polymerase是 以ATP为底物对RNA的3'羟基端添加腺苷酸形成polyA尾部结构。

 

来源：重组大肠杆菌

 

规格：5U/μL

 

活性单位定义：1单位活性定义为20μL的反应体系，37℃、10分钟内，掺入1nmol AMP 到酸性不溶物质所需的酶量。

 

酶存储缓冲液：20mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 1mM EDTA, 300mM NaCl, 1mM DTT, 0.1%(v/v) Triton X-100, 50%(v/v) glycerol

 

配套溶液：10X poly(A) Polymerase Reaction Buffer, Cat#ON-127, 500mM Tris-HCl, (pH7.9, 25℃), 2.5M NaCl, 100mM MgCl₂

 

相关产品推荐：10X poly(A) Polymerase Reaction Buffer, Cat#ON-127; Taq DNA Polymerase, Cat#ON-007; RNase inhibitor, Cat#ON-039; pfu DNA polymerase, Cat#ON-051; High Yield T7 RNA Synthesis Kit, Cat#ON-040

操作要点：
 

操作流程：本流程适用于小于10μg的RNA添加150bp长度的poly(A)尾部结构。来源于IVT反应的RNA需要纯化后，才能用于poly(A)加尾反应。

1. 按下列配方配置反应液：

RNA	1~10μg
10X poly(A) Polymerase Reaction Buffer	2μL
ATP(10mM)	2μL
Poly(A) polymerase	1μL
(可选) Rnase inhibitor	20units
Nuclease-free H2O	to 20μL

2. 37度保温60分钟

3. 终止反应，加入EDTA至终浓度大于11mM

* 热变性的RNA可能会提高加尾反应的效率
 

储藏温度：-20℃

质控检测：无DNase、Nickase、RNase污染

纯度：SDS-PAGE纯度：大于95%

参考文献：
 

1. Bernstein P and Ross J (1989) Poly(A), poly(A) binding protein and the regulation of mRNA stability. Trends Biochem Sci 14: 373–377.

2. Gallie DR (1991) The cap and poly(A) tail function synergistically to regulate mRNA translational efficiency. Genes Dev 5: 2108–2116.

3. Krug, M.S. and Berger, S.L. (1987) Methods Enzymol. 152, 262.