Universal Color DNA Purification Kit

通用型彩色 DNA 纯化回收试剂盒

目录号:43018

产品内容：

自备试剂：

无水乙醇

保存条件：

室温（15 ~ 25℃）

产品简介：

本试剂盒既能从TAE 或TBE 琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段，又能用于直接纯化 PCR 产物，满足多种实验需要。Buffer GS 溶液中含有 pH 指示剂，可根据颜色来判断溶胶或 PCR 产物回收是否达到最佳状态。使用本产品可回收 100bp~8kb 大小的DNA 片段，回收率可达 80%，该试剂盒操作简便，得到的 DNA 片段可用于酶切、连接、测序等实验。

产品特点：

1.         快速：步骤少，操作简便，整个操作仅需 15 分钟。

2.          高效：每个离心吸附柱可吸附 10 ug 以上的 DNA 片段，回收效率在 85%以上。

注意事项：

1.   Buffer BL 的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。

2.  使用前请先检查Buffer BL、Buffer GS 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
       3.  溶液Buffer GS 含有 pH 指示剂，为黄色，指示 pH≤7.5。

4.  切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA 造成损伤。

5.    回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。

操作步骤：

第一次使用前，请先在 Buffer WB2 中加入无水乙醇，并打对勾标记，加入体积请参照瓶上的标签。

一、从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段

1.   柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 ul Buffer BL，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

2.   切胶：在长波紫外灯下，用干净刀片将目的 DNA 条带切下，尽量切除不含 DNA 的凝胶。

3.   称重：将切下的含有目的 DNA 条带的凝胶，放入 1.5 ml 离心管中，称取凝胶重量（去除空管重量）。如果凝胶重量为 100mg，其体积可视为 100ul。

4.    溶胶：加入等体积 Buffer GS，60℃水浴，每隔 2 ~ 3 min 上下振荡，直到凝胶完全溶解。

（如果凝胶浓度大于 2%，应加入 2 倍体积 Buffer GS。对于回收<300 bp 的小片段，可在凝胶完全溶解后，再加入 0.5 倍胶块体积的异丙醇以提高回收率。）

5.   吸附：待溶液冷却至室温后加入吸附柱中，室温静置 2 min，然后 12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

（如果总体积超过 750 ul，可分 2 次将溶液加入同一离心吸附柱中）

6.   漂洗：加入 500 ul 漂洗液Buffer WB2，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

7.    二次漂洗：重复操作步骤 6。

8.   干燥：将吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 离心 2 min，甩干膜上残留的乙醇，防止其抑制下游反应。

9.   回收：将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 离心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脱液 Buffer EB，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 1 min 收集 DNA 片段。

（注意：为增加回收效率，可将洗脱液在 65℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集。）

二、 从 PCR 反应液或酶切反应液中回收 DNA 片段

1.  柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 ul 平衡液Buffer BL，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

2. 加结合液：估计PCR 反应液或酶切反应液的体积，向其中加入等体积溶液Buffer GS，充分混匀。

（注意：对于回收小于 150bp 的小片段可将溶液 Buffer GS 的体积增加到 3 倍以提高回收率）

3.   吸附：将上一步所得溶液加入一套吸附柱中，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

（ 注意：吸附柱容积为 750ul，若样品体积大于 750ul，可分批加入）

4.    漂洗：加入 500ul Buffer WB2，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

5.   二次漂洗：重复操作步骤 4。

6.   干燥：将吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 离心 2 min，甩干膜上残留的乙醇，防止其抑制下游反应。

7.   洗脱：将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 离心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脱液Buffer EB，室温放置 2 min。12,000 rpm 离心 1 min，收集 DNA 片段。（注意：为增加回收效率，可将洗脱液在 60℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集。）