pfu DNA polymerase

 

产品描述：pfu DNA polymerase是一种热稳定的DNA聚合酶，其分子量为90kD。具有5'-3'DNA聚合酶活性和3'-5'外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。pfu DNA polymerase相比于Taq DNA Polymerase出错率较低的，其错误率仅为1.3x10^-6。其PCR产物为平端，可加A处理再与TA载体连接或使用平末端克隆载体。

 

来源：重组大肠杆菌

 

规格：3U/μL

 

活性单位定义：1单位活性定义为74℃、30分钟内，掺入10nmoles的dNTPs到酸性不溶物质所需的酶量。

 

酶存储缓冲液：50mM Tris-HCl （pH8.2, 25℃）, 0.1mM EDTA, 0.1% Tween-20, 0.1% NP-40, 1mM DTT, 50% Glycerol

 

配套溶液：10X pfu Reaction Buffer, ON-068， 200mM Tris-HCl（pH8.8, 25℃），100mM KCl, 100mM (NH₄)₂SO₄, 20mM MgSO₄, 1%Triton X-100
 

相关产品推荐：10X pfu Reaction Buffer, Cat#ON-068; Taq DNA polymerase, Cat#ON-007; Taq DNA Ligase, Cat#ON-069; T4 DNA Ligase, Cat#ON-157

操作要点：
 

1. pfu  DNA polymerase具有3'→5'的外切酶活性, 因此延伸率 (0.5-0.6kb/min) 低于 Taq DNA Polymerase(1kb/min), 延伸时间取决于扩增产物的长度;同时, 由于3'→ 5'的外切酶活性, pfu DNA Polymerase 聚合酶可能会降解引物, 因此配制反应体系时最后加入pfu  DNA Polymerase。

2. 在用 pfu DNA Polymerase扩增时, 需要更高的引物纯度。底物长度应大于 18 bp, Tm 值在55-80℃, 引物浓度在0.1-0.5μM之间, 略高于Taq DNA Polymerase.

3. 对于高GC含量的模板, 变性温度可提高到 98℃,对 DNA Polymerase活性无影响。
 

储藏温度：-20℃

质控检测：无DNase、Nickase、RNase污染

纯度：SDS-PAGE纯度：大于95%

参考文献：

1. Kelly S. Lundberg, Dan D. Shoemaker, Michael W. W. Adams, et al. Gene 108, 1-6 (1991).