核酵母双杂交点对点试剂盒

实验原理

酵母核体系双杂交技术是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究，GAL4包括两个结构域，即DNA结合结构域（DNA-binding domain，BD）和转录激活结构域（Activating domain，AD）。BD能够识别位于GAL4效应基因（GAL4-responsive gene）的上游激活序列（Upstream activating sequence，UAS）并与之结合，AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD分别单独作用并不能激活转录，但是当二者在空间上充分接近时，则呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子，转录启动子下游基因并使其表达。

Y2HGold菌株是GAL4系统酵母双杂实验用菌株，可直接转化质粒进行蛋白互作验证。Y2HGold-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。质粒 pGBKT7的筛选标志为 TRP1，用于表达 BD (来自酵母转录因子GAL4 N端 1~174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒 pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD（GAL4 C端768~881位氨基酸）与目标蛋白（Prey）的融合蛋白。本试剂盒提供的产品包含了酵母双杂验证过程中用到的各种培养基以及酵母转化试剂，操作简单，能用于10对双杂的互作验证（质粒需自行扩繁）。

试剂盒组分