膜体系酵母双杂点对点验证试剂盒

实验原理

膜体系酵母双杂是基于分离的泛素(split-ubiquitin)介导的膜蛋白酵母双杂交系统，该系统可用于膜蛋白-膜蛋白或膜蛋白-胞质蛋白之间的互作检测。

泛素是一种含76个氨基酸的保守蛋白，它经常作为降解信号连接在蛋白质的N端。泛素能被其特异性的蛋白酶(ubiquitin-specific proteases, UBPs)识别并从所连接的蛋白上切割下来，切割位点总是位于泛素蛋白的C端。

在酵母细胞中，泛素可以分成两部分单独表达，即其N端部分(NubI, 第1~34位氨基酸)和C端部分(Cub, 第35~76位氨基酸)，后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA-VP16蛋白。

野生型NubI和Cub具有高亲和力，并且可以自发重组形成异源二聚体。但是当野生型NubI的第13位Ile被Ala或Gly取代后，NubI和Cub就不能自发结合，因此，NubG（I13G）和Cub-LexA-VP16只有依靠bait和prey相互作用进行连接形成完整的泛素分子，然后诱导UBPs识别并于其C端进行剪切，从而释放出转录因子LexA-VP16，最终启动核内报告基因（HIS3、ADE2、LacZ）的转录

实验流程

试剂盒组分