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Hyperactive pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag
蛋白质-DNA互作
· 操作简单：可一步实现DNA的片段化和接头连接，仅需9 h即可实现从细胞到二代测序文库的转化
· 高活性：兼具Protein A&Tn5活性，DNA片段化活性较高
· 细胞起始量低：可兼容低至60个细胞，甚至单细胞
· 纯度高：蛋白纯度高、核酸残留低
应用于CUT&Tag技术
CUT&Tag（ Cleavage Under Targets and Tagmentation）是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术，与后者相比，它具有显著优势，如：信噪比高，可重复性好，实验周期短（1天实现从细胞到文库构建），细胞投入量低等，因此，该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。
CUT&Tag技术的实验流程简单，主要包括：①收集细胞；②分别孵育一抗和二抗；③孵育经过Hyperactive pA/pG-Tn5 Transposase for CUT&Tag （#S603/S602）制备的转座子；④激活转座子，进行DNA片段化； ⑤DNA提取； ⑥文库扩增与纯化。
活性检测
如图所示，对使用#S603反应体系（2 μg和10 μg体系）生成的转座子进行活性检测，针对不同的DNA投入量（50 ng和100 ng），1 μl转座子可快速（10 min）实现DNA片段化，说明该融合酶活性高。
Hyperactive pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag是将Protein A与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶进行融合，形成同时具备转座酶与Protein A活性的新型融合酶，专门适用于蛋白质-基因组互作研究的CUT&Tag技术。与传统的蛋白质-基因组互作研究方法ChIP-Seq相比，CUT&Tag具有显著优势，该技术实验周期短，信噪比高，可重复性好，且细胞投入量低，尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。
| 组分 | S603-01 (10 μg) | S603-02 (20 μg) |
| Hyperactive pA-Tn5 Transposase ( 500ng/μl)a | 20 μl | 40 μl |
| 5 × Tagment Buffer Lb | 250 μl | 500 μl |
| Coupling Buffer | 250 μl | 500 μl |
| Annealing Buffer | 500 μl | 1 ml |
a. #S603的质量浓度是500 ng/μl，换算成摩尔浓度是7.5 pmol/μl；
b. 5 × Tagment Buffer L含Mg2+，用于测试制备的转座子片段化DNA的效果，而非CUT&Tag工作Buffer。
整个试剂盒于-85 ~ -65℃保存，干冰运输；收到货后Hyperactive pA-Tn5 Transposase于-85 ~ -65℃保存，
其余组分可于-30 ~ -15℃保存；生成的转座子于-30 ~ -15℃保存，有效期一年。
