核蛋白酵母双杂交建库试剂盒|膜蛋白酵母双杂交建库试剂盒|核/

实验原理

酵母核体系文库构建试剂盒，提供了一种从总RNA或者poly A+ RNA获得高质量全长cDNA文库的方法。本试剂盒在GAL4酵母单双杂的系统上，通过对PGADT7 序列载体进行改造，额外增加了三框文库的构建。本产品适用于从100 ~500 μg 不同来源的真核生物总 RNA 中，经过 mRNA 分离、单链 cDNA 合成、双链 cDNA 合成、双链 cDNA 分选、小量连接转化、大量连接转化，构建获得高质量的酵母cDNA文库。该试剂盒提供的试剂可以用来构建5个cDNA文库。

相较于市面上其他的试剂盒，本试剂盒针对建库质量做了以下优化：

    1.该试剂盒提供的反转录酶是市面上经过改造的MMLV 反转录酶，显著增加了反转录酶的热稳定性和半衰期，合成cDNA效率更高，片段长度完整性更好；

    2.该试剂盒通过对PGADT7载体进行了移码突变，形成三个不同的读码框（命名为PGADT7-S1，PGADT7-S2，PGADT7-S3），相对传统以引物的方式引入的突变而言，新型的三框文库构建方式只需要合成一份双链cDNA，可以保证三框文库的片段长度，阳性率，文库滴度等信息的一致性。

    3.该试剂盒在三框文库载体的基础上，通过引入CCDB自杀基因极大降低了空载的产生，基本实现100%阳性率；

    4.该试剂盒提供的DH10B是经过了高抗性压力筛选的菌株，配合试剂盒中的优良方法制备的感受态以及对应的仪器工作条件，文库的转化效率能够达到至少1×10^10；

    5.该试剂盒提供的试剂与市面上其他公司相比，更加齐全，基本不需要再额外购买其他试剂材料。

实验流程

实验时间表

试剂盒组分

常见问题