T7RNA聚合酶

【适用范围】

T7 RNA聚合酶是一种来源于T7噬箇体的RNA聚合酶，对T7噬箇体启动子具有极高特异性。T7 RNA聚合酶是一种DNA 依赖性的RNA 聚合酶,能够在体外以单链或双链DNA为模板，从启动子开始催化模板DNA下游5'→3' RNA 合成，具有极高的转录效率。

【产品组分】

组分	体积
T7 RNA聚合酶（1mg/mL）	20 μL
5×Transcription Buffer	50 μL

1×Transcription Buffer: 40 mM Tris-HCl, pH 7.8, 20 mM NaCl₂, 6 mM MgCl₂, 2 mM spermidine-HCl, 10 mM DTT

【储存条件及效期】

于-20 ℃保存，有效期为24 个月。

【热失活】

70℃，10min

【反应体系及条件】

组分	体积
5×Transcription Buffer	10μL
ATP/GTP/CTP/UTP(25 mM each)	4μL
T7 RNA Polymerase（1 mg/ mL）	5μL
RNase Inhibitor（40 U/μl）	1μL
DNA 模板	1μg
DEPC-treated Water	Up to 50 μL

a. 37度孵育2小时
b. 如需去除DNA模板，加入2μL DNase I（1U/μl）终止反应
c. 终止反应：加入2 μL 0.2 M EDTA(pH8.0)或者 70°C反应10 min。
 

【注意事项】

1. 转录反应体系的配制应在无 RNase 污染的环境中完成，操作过程建议佩戴手套以及口罩，使用高压灭菌的水及枪头。
2. 该酶活性极强，对模板DNA纯度要求不高，PCR产物经乙醇沉淀后可直接用于转录。

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