概述:Tn5转座酶是野生型Tn5转座酶的高活性突变体,可以高效的将Tn5转座子插入到目标序列。Tn5转座酶识别 Tn5转座子酶序列的内端(inside end,IE)、外端(outside end,OE)和嵌合端(mosaic end,ME)序列,含有ME序列片段的 体外转座效率最高。Tn5转座酶的插入位点具有很高的随机性 ,因此被广泛的用于体外转基因(外源基因整合到宿主细 胞)和二代测序建库等领域。
来源:含有Tn5转座酶序列的大肠杆菌菌株。
应用:体外转基因(外源基因整合到宿主细胞),二代测序建库。
贮存溶液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25 °C),100 mM NaCl,0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100和50%甘油(V/V)。 反应缓冲液(随酶提供):5× LM 缓冲液、10× TPS 缓冲液。
单位定义:1单位 Tn5转座酶指37°C条件下反应1小时,完全切割1 μg含有识别序列的DNA片段所需要的酶量。
质量控制检测:
核酸外切酶活性:50 μl反应体系中,20 U本酶与1 μg的Hind III消化的λDNA于37°C温育4小时,DNA的电泳条带无明显变化。
RNase活性:50 μl反应体系中,100 U本酶与250 ng大肠杆菌rRNA于37°C温育2小时,琼脂糖电泳检测,被降解的rRNA小于1%。