♦ 除去 DNA、RNA、rNTPs 和 dNTPs 5' 末端的磷酸基团 ♦ 防止克隆载体的自连接 ♦ 蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化 ♦ 为 5' 末端标记准备模板 ♦ 去除 PCR 产物中的 dNTP 和焦磷酸盐
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概述 热敏磷酸酶能催化除去DNA或RNA末端的5′磷酸基团。由于磷酸酶处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端，因此它们不能进行自连接(1)。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。
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来源 源于含TAB5 AP 基因的E . coli 菌株，该基因最初克隆于质粒pNI(2)中，后来重新克隆于质粒pEGTAB7-4.1中(3)。
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反应条件 10X 热敏磷酸酶反应缓冲液
[50 mM Bis Tris-丙烷，1 mM MgCl2 ，0.1 mM ZnCl2 (pH 6.0 @25°C)]。 如果反应在 NEBuffer1,2,3,4 或特有Buffer(如：EcoRI Buffer) 中进行，必须在反应体系中补加热敏磷酸酶反应缓冲液至 1X 终浓度。
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质保声明 无核酸内切酶和外切酶污染。
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磷酸酶热失活：在标准反应条件下，加入 10 单位的酶和 DNA，去磷酸化 30 分钟，然后在 65 ℃ 加热。残留的磷酸酶活性用对硝基苯磷酸盐（pNPP）检测。
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单位定义 1 单位指在 37 ℃条件下，30 分钟能使1μg 经 HindIII（产生 5' 突出末端）、EcoRV（产生平齐末端）或 PstI（产生 5' 凹陷末端）消化的 pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 >95% 的 DNA 再环化（通过转化 E.coli 细胞来检测）。
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活性检测条件 在补加有热敏磷酸酶反应缓冲液的限制性内切酶缓冲液中进行载体 DNA 的去磷酸化。50 ng 载体的连接反应用 NEB 的快速连接试剂盒（NEB #M2200）进行。
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浓度 5,000 units/ml。
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贮存条件 10 mM Tris-HCl（pH 7.4），1 mM MgCl2，1 mM DTT，0.01 mM ZnCl2 和 50% 的甘油。于 -20 ℃ 贮存。
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热失活 65°C 5分钟。
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参考文献 (1) Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual , (2nd ed.), (p. 5.72). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
(2) Rina, M. et al. (2000) Eur. J. Biochem ., 267, 1230–1238.
(3) Guthrie, E., unpublished observations.
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