Taq DNA连接酶

制品说明：
Taq DNA连接酶可催化双链DNA中相邻的5’-磷酸基和3’-羟基形成磷酸二酯键。NAD+是该酶的辅助因子。

用途：
·用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测
·通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变

来源：
携带Taq DNA连接酶基因的重组 E.coli菌株。

浓度（比活）：
400,000 U/mg

贮存条件：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
0.1% Tween-20
50% 甘油
pH 7.5，25℃保存

随酶提供：
10X Taq DNA Ligase Buffer

10X Taq DNA Ligase Buffer
200 mM Tris-HCl
250 mM 醋酸钾
100 mM 醋酸镁
5 mM NAD+
0.1% Triton X-100
pH 7.6，25℃保存‘

单位定义：
1单位是指在50μL 1XTaq DNA Ligase Buffer反应体系中，45℃反应条件下，孵育15分钟能使50%的经Hind III消化的12bp粘性末端片段发生连接所需要的酶量。

核酸内切酶活性：
在50μL反应体系中，10μL酶溶液与0.5μg pENZuC DNA作用，37℃孵育4小时，经琼脂糖凝胶电泳，无肉眼可见的环状切口DNA出现。

DNA污染检测（Real-time PCR法）：
将5μL酶溶液变性，用16s rRNA基因位点的寡聚核苷酸引物，进行TaqMan qPCR分析，筛选并检测E.coli基因组DNA污染物的存在。检测合格的判定依据3个无模板对照样品的平均Ct值。根据无模板对照样品的Ct值与标准曲线的比对结果，本检测的下限可达到10个拷贝/样品。

法律声明
专利：
本产品及本产品的应用受到美国及国外专利的保护。购买本产品并不包含这些专利的授权。因此，购买本产品的用户需自行决定是否需要就某些特殊的应用获得公司签发的专利授权。

质量控制分析
单位定义方法：
酶的单位活性是通过2倍连续稀释法测得的。用1X Taq DNA Ligase Reaction Buffer稀释Taq DNA Ligase，将其加入含1.0 μg DNA和1X Taq DNA Ligase Reaction Buffer的50μL反应体系中，Taq DNA Ligase终浓度0.0008~0.1μg/μL。45℃条件下孵育30分钟，然后进行0.8%的琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭（EB）染色观察。

SDS-PAGE（物理纯度检测）
4-20%的变性Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝胶，取2.0μL浓缩酶上样，两侧分别取能够分辨分子量范围较大的蛋白Marker和2.0μL 100倍稀释的待测酶上样。凝胶电泳后进行染色，通过比较上样样品确定酶的纯度。本次检测的验收标准为，当浓缩样品中的污染物条带的总质量不超过稀样品中的目的条带的蛋白质的质量时，可判定浓缩样品的浓度大于99%。

核酸污染检测
单链核酸外切酶活性：
在50μL反应体系中，10μL酶溶液和11,000 cpm放射性标记的单链DNA底物作用，37℃孵育4小时，溶液中可溶性TCA的释放量应小于5%。

双链核酸外切酶活性：
在50μL反应体系中，10μL酶溶液和5,000 cpm放射性标记的双链DNA底物作用，37℃孵育4小时，溶液中可溶性TCA的释放量应小于0.5%。

推荐贮存条件：
-20℃