KAPA 二代测序文库定量试剂盒

适用平台： 1、Illumina Genome Analyzer 2、Roche 454 GS Titanium and FLX 3、ABI SOLiD 快速、高效定量、可靠的文库定量对于二代测序十分重要 1、过高估计文库的大小，导致数据读取量少，基因组覆盖率低； 2、过低估计文库的大小，导致clusters或多重模板太多，数据质量不高； Real-time PCR 与二代测序文库定量 1、只有qPCR可以定量文库中模板的数量，利于emPCR和桥PCR反应； 2、qPCR灵敏度高，可以精确定量，且所需试验材料量极少。 结论:qPCR是二代测序中文库定量的最佳选择。 普通qPCR方法的缺点： 1、普通qPCR含有的是野生型Taq酶，而反应体系中的SYBR Green燃料对其有抑制： （1）扩增长度大于400bp时，扩增效率降低； （2）GC或AT含量过高是，扩增效率降低。 2、自制DNA标准品，费时，定量不准，不能保证每个孔的均一性。 KAPA二代测序定量试剂盒克服以上缺点： 1、DNA聚合酶是二代酶，对抑制剂不敏感，与DNA结合更好，单位酶扩增效率更高，可以扩增长片段（1kb）和复杂结构的模板； 2、试剂盒中的DNA标准品是专为二代测序平台设计，稳定性高，均一性好。 KAPA SYBR FAST qPCR试剂盒优点： 1、反应效率高； 2、可扩增AT/GC含量高的模板； 3、高灵敏度和线性特征； 4、动态范围宽 5、重复性强； 6、速度快，且灵敏度与效率高。

美国几大二代测序中心已经开始使用该试剂盒 1、US Next Generation Sequencing Centres (NGSC) 2、Broad Institute 3、the Joint Genome Centre 4、 the J Craig Venter Institute 5、Beckmann Coulter and UC Berkley