HPV假病毒

HPV假病毒说明书

【产品名称】
通用名称：HPV假病毒 
【包装规格】
15/30/50/100μl/管
【预期用途】
用于HPV抗血清或者单抗中和抗体滴度体外检测。
【检验原理】
中和抗体在体外与假病毒中和，使得假病毒丧失感染细胞的能力，进入细胞的假病毒会表达EGFP等蛋白，通过Elispot读板仪扫描并计数每孔荧光斑点数，通过与假病毒对照组荧光斑点数比较，计算其抑制百分比，通过计算公式可以计算出当假病毒50%被抑制时抗体的稀释倍数，来计算其ID₅₀,用ID₅₀来表示抗体对假病毒中和活性大小。
【主要组成成分】
HPV假病毒颗粒，L1和L2蛋白以及报告基因，自折叠成HPV假病毒颗粒
【储存条件及有效期】
-80℃ 密封贮存。有效期：长期。
避免反复冻融。
生产日期及有效期详见标签。
【样本要求】
样本为HPV假病毒，可在体内复制一轮，操作时需在无菌条件下操作。
【检验方法】
1 预先4-8小时铺293FT细胞于96孔板，每孔细胞数为1.5×10⁴ ，置于37℃、 5% CO₂孵箱中培养。
2 加样顺序
2.1 40倍初始稀释：取96孔U型板，于B4- B11孔中各加入152μl DMEM完全培养基，其余各孔中加入120μl DMEM完全培养基。于B4- B11孔中加入血清样品8μl/孔，每样品两复孔。
2.2 10倍初始稀释：取96孔U型板，于B4- B11孔中各加入128μl DMEM完全培养基，其余各孔中加入120μl DMEM完全培养基。于B4- B11孔中加入血清样品32μl/孔，每样品两复孔。
加样顺序表

				样品1		样品2		样品3		样品4
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A
B		细胞对照（培养基）	病毒对照（假病毒+培养基）
C
D
E
F
G
H

3样品稀释：将多道电动移液器调至40μl移液和100μl混匀程序，对B4- B11孔中液体轻柔的反复吹吸8次充分混匀，然后转移40μl液体至对应的C4- C11孔，轻柔的反复吹吸8次后转移至D4-D11孔，以此类推，最后从G4-G11孔中吸弃40μl液体。
5.2.4 用DMEM完全培养基将假病毒稀释至200TCID₅₀，于第B3-G11孔，每孔加120μl。
5.2.5将稀释板4℃ 放至1小时。
5.2.6 从稀释板各孔中吸取100μl的假病毒血清混合物（或培养基）贴壁缓缓加入预先已铺好细胞的培养板对应孔中，轻拍培养板四周混匀。  
5.2.7 将细胞培养板置于37℃、5% CO₂的孵箱中培养60-96小时。
5.2.8 ELISPOT读板仪进行检测，计算感染抑制率（%）=1-（样本检测值-细胞对照值）/（病毒对照值-细胞对照值）×100%。
5.2.9 计算ID₅₀。
【阳性判断值】
中和实验过程中需要设置阴性对照，阳性对照，作为参照，来判断实验是否成立，阴性对照ID50小于30，阳性ID50大于30作为判断值
【产品性能指标】
1. 外观
外观应满足如下要求：
1.1包装完整，无破损；外观应整洁，文字符号标识清晰；
【注意事项】

1. 本产品仅供中和抗体体外检测。
2. 减少反复冻融
3. 流水或者4℃融化使用。
4. 无菌操作。
5. 本产品不能重复使用。