【产品规格】

1. TL50  50*3 Reaction
2. TL100  100*3 Reaction

【产品说明】

端粒（Telomeres）：是真核生物线性染色体末端的非编码串联重复性(TTAGGG)n阵列，端粒长度的变化，与衰老、癌症、或神经退行性等多种疾病相关。定量PCR法是检测端粒长度的经典技术，用时短，操作简单，结果准确，适用于批量样本检测。
本产品试剂盒采用双色荧光 qPCR（SYBRgreen+VIC）检测

端粒相对长度，检测对象为血液、口腔拭子或细胞DNA。该试
剂盒具有以下特点。

1. 稳定：全程闭管操作，无交叉污染。
2. 可靠：端粒与内参单管检测，减少孔间干扰。

    内参基因为多拷贝，与端粒量差降低。

1. 方便：操作简单，无需电泳步骤。
2. 定量： △CT 值，可定量检测端粒相对长度。

【运输及保存条件】

低温冷冻运输， -20℃保存，有效期 1 年，冻融以后，4℃保存，有效期4周。

【产品组分】

组分名称	TL50	TL100
Biowing®Telomere Detection Mix	1560µL	3,120µL
Primer	840µL	1,680‬µL
Standard	100µL	200µL
RNase Free Water	100µL	100µL

注：本试剂盒提供试剂，使用前请上下轻柔颠倒十次混匀，后低速离心、小心开启。避免起泡。

【操作步骤】

1. 样品质控

使用商业化DNA抽提试剂盒提取血液、细胞或组织DNA，DNA纯度A260/A280≈1.8，检测样品浓度标化为15~20ng/µL，上样4µL。
注：标准品浓度已标化为15~20ng/µL，上样4µL。样品及标准品浓度过高或过低会影响扩增效率，对实验造成干扰，测量结果误差较大。

1. qPCR反应体系及条件

反应体系以20µL为例

组分/样品管	待测样品管(µL)	阴性对照管(µL)	标准品对照(µL)
Biowing®Telomere Detection Mix	10.4	10.4	10.4
Primer	5.6	5.6	5.6
RNase Free Water	0	4	0
Standard	0	0	4
Sample	4	0	0

PCR仪设置以 ABI 7500为例，其他型号定量PCR仪应通过标准品进行参数校正或咨询专业技术人员。
 

步骤		循环数	温度	时间
1	预变性	1	95℃	2 min
2	变性	40	95℃	15 s
	退火		50℃	1 min
	延伸		72℃	45 s
温度选择：50℃退火时收集荧光信号
通道选择：样本检测通道-SYBRgreen；内参检测通道-VIC

【基线设置】
内参基线设定：以标准品基线设定内参基线，将内参的基线设定为6~12个循环。
端粒基线设定：以标准品基线设定端粒基线，将端粒的基线设定为3~7个循环。
【阈值设置】
内参阈值设定：以标准品CT值设定内参扩增曲线阈值，将内参的 CT 值定为 17±1。
端粒阈值设定：以标准品CT值设定端粒扩增曲线阈值，将端粒的 CT 值定为12±1 。

说明：

（1）如果标准品的内参CT 值>25，但阴性对照管的内参CT 值正常， 表明试剂盒扩增效率下降或仪器运行障碍。
（2）如果阴性对照管的内参或端粒CT＜25，表明在环境或加样过程中存在轻微污染。
备注：

1. 样本检测以及标准品的使用应做技术上三重复，阴性对照做单重复。
2. 如果检测样本为血液DNA，可以将所得端粒相对长度在上海翼和应用生物技术有限公司构建的1500例中国人群数据库比对，评估样本个体端粒的相对长度；若选用其他样本，建议自行构建数据库并做进一步分析。 
3. 端粒长度计算方法（T/S）：先分别计算标准品与样品的△CT=CT（端粒）-CT（内参）

                            再计算 T/S=2^{-(△CT(样品)-△CT（标准品）)}
注：T为待测样品，S为标准品，T/S为待测样品与标准品的端粒相对长度比