HiPerFect Transfection Reagent

特点

• 低浓度条件下的siRNA高效转染
• 高效转染原代细胞，细胞存活率高
• 高效转染悬浮细胞和巨噬细胞
• TransFect Protocol Database中有针对特殊细胞类型的实验方案
• 高效转染miRNA模拟物或抑制剂

产品详情

HiPerFect Transfection Reagent是一种阳离子和中性脂组成的独特混合物，能够有效摄入siRNA和有效释放细胞内部的siRNA，即使使用低浓度的siRNA也可高效敲除基因。除了siRNA，HiPerFect Transfection Reagent还适用于低通量和高通量的转染miRNA模拟物或抑制剂。TransFect Protocol Database中有适用于特殊细胞类型的实验方案。

绩效

各种悬浮细胞系以及分化和未分化的巨噬细胞已进行过检测，通过使用HiPerFect Reagent进行siRNA转染检测。许多细胞系可成功转染，并有效敲减靶基因表达（见表1）。使用HiPerFect Reagent转染对于一些需电穿孔转染的细胞类型来说是最佳选择。

 表1.使用HiPerFect Reagent成功转染的细胞系 

细胞系	细胞类型	siRNA的浓度	敲减
K562	人慢性髓性白血病	5 nM	85%
Jurkat	人T细胞	75 nM	83%
D1.1	人T细胞	50 nM	84%
RAW 264.7	小鼠巨噬细胞	25 nM	77%
J774.A1	小鼠巨噬细胞	50 nM	97%
PMA-differentiated THP-1	人急性单核细胞白血病	5 nM	82%
MEL	鼠红白血病	5-20 nM	50-70%

 

HiPerFect Reagent不适合转染的细胞系（见表2）。

 表2.HiPerFect Reagent不适合转染的细胞系 

细胞系	细胞类型
Raji	人B细胞
U937	人巨噬细胞
Molt4	人T细胞
Molt14	人T细胞
HL60	早幼粒细胞系
E6.1	人T细胞

 

当siRNA的浓度在1–50 nM之间时，可有效敲除（>80%）（参见" HiPerFect Reagent provides effective CDC2 knockdown"）。使用1 nM siRNA转染的敲除率为86%，而5 nM siRNA转染的敲除率可达96%。最佳的siRNA使用浓度为1 nM（最少的脱靶效应并有效敲除，参见" Efficient transfection of NHEK"）或5 nM（更高的敲除效率）。

原理

siRNA转染可能发生脱靶效应，即siRNAs影响非同源或部分同源靶基因的表达，但在很大程度上可通过使用低浓度的siRNA避免。使用HiPerFect Transfection Reagent，可高效的转染和沉默基因，在某些情况下可使用10 pM siRNA。使用HiPerFect Transfection Reagent可在很宽的siRNA浓度范围内高效转染siRNA，可使研究者选择他们所需的siRNA浓度。可用于转染多种类型的细胞，包括：HeLa、HeLa S3、HEK 293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC和NHLF。

miRNA研究

micro RNAs（miRNAs）是一类内源性小分子RNA，与siRNAs特点相同。miRNAs在多种生物过程中有重要作用，如生长、分化和调亡。转染合成的miRNA模拟物和抑制剂，是一种用于解释特定miRNAs的靶标和作用的技术。miRNA模拟物是一种化学合成的miRNAs，模拟转染细胞的自然产生的miRNAs。miRNA抑制剂是一种单链修饰RNAs，能够特异性抑制miRNA的功能。转染miRNA模拟物抑制基因的表达，或转染miRNA抑制剂增强基因的表达，由此证明目的miRNA调节该基因的表达。而且，miRNAs在各种信号通路中的作用也可通过检查转染miRNA模拟物或抑制剂后特异性的基因表型来确定。筛查实验也可通过检查转染大分子量miRNA模拟物或混合物后的基因表型来进行。HiPerFect Transfection Reagent用于真核细胞siRNA的高效转染，也可用于miRNA模拟物或抑制剂的低通量或高通量转染。

程序

HiPerFect Transfection Reagent是一种即用型溶液，只需将其加入已稀释的siRNA/miRNA溶液、混合、孵育并将混合物转移到细胞即可。转染可在有血清的条件下进行，无需去除细胞中的其他物质。除了HiPerFect Transfection Reagent Handbook中的实验方案，您可以在TransFect Protocol Database中找到适合您的细胞类型和培养瓶/培养皿的实验方案。该数据库提供您所需的确切的实验方案，而不是调整已有的实验方案，节省时间和精力。只需输入细胞类型、核酸和培养瓶的类型即可打印或下载QIAGEN转染实验方案的PDF格式。TransFect Protocol Database是免费的，且无需注册。

 HiPerFect Transfection Reagent转染，可使用常规的转染步骤，在转染前24小时种细胞。同时也提供使用96孔板和384孔板反转染的实验方案（见HiPerFect Transfection Reagent Handbook）。这些实验方案，可在同一天种细胞和进行转染。加入HiPerFect Reagent后，将siRNA/miRNA加入孔中。混合均匀后，将细胞加入孔中（参见" Reverse transfection using HiPerFect Transfection Reagent"）。反转染实验方案快速、方便、可实现自动化，通常用于高通量实验。

应用

即使siRNA浓度较低，HiPerFect Transfection Reagent也能够高效进行siRNA转染，适合多种应用，如：

• RNA干扰研究
• miRNA研究
• 基因表达和功能研究