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Amplite® Fluorimetric Glutathione Assay Kit *Green Fluorescence*
货号;10055
Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测谷氨酸的试剂盒，物系统中半胱氨酸的试剂和试剂盒很少，并且在为数不多的商业化半胱氨酸检测试剂盒中存在灵敏度较低、操作较冗长等缺点。Amplite荧光法谷胱甘肽分析试剂盒 *绿色荧光*对样品中谷胱甘肽提供超敏感实验用于定量。这个试剂盒利用专有的无荧光染料通过与硫醇反应产生强荧光。本试剂盒提供敏感的一步荧光方法，并且在100 ul检测体积中能检测到1pmol的半胱氨酸或者谷胱甘肽。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 540nm |
| Em： | 590nm |
| cutoff: | 570nm |
| 推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10至60分钟
4.检测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（cut off= 515 nm）
溶液制备
1.储备溶液
1.1 GSH标准溶液（1 mM）：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液。
1.2 Thiolite Green原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备100X Thiolite Green原液。
2.标准溶液
2.1醛标准溶液
将30μL的1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液加入到970μL的测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol /μL）GSH标准溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到用分析缓冲液（组分B）连续稀释的GSH标准品（SD7-SD1）。 注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。
3.工作溶液
将50μL 100XThiolite Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。
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样品分析
表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1 - SD7,0.01至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品
| BL | BL | TS | TS |
| SD1 | SD1 | ... | ... |
| SD2 | SD2 | ... | ... |
| SD3 | SD3 | ||
| SD4 | SD4 | ||
| SD5 | SD5 | ||
| SD6 | SD6 | ||
| SD7 | SD7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| SD1-SD7 | 50ul | 连续稀释液（0.01至10μM） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液 |
| TS | 50ul | 测试样本 |
1.根据表1和2中提供的布局制备GSH标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。
2.在GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGSH工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGSH工作溶液，总体积为50μL/孔。
3.在室温下孵育反应10至60分钟，避光。
4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下检测荧光增加。
