OneShine CRISPR/Cas9 基因敲除细胞文库

官网产品链接：
一、原理
Lenti-CRISPR V2质粒图谱如下所示。gRNA与Cas9蛋白结合于同一个载体上。我们设计合成了12万个gRNA（靶向约2万个基因），分别连接到Lenti-CRISPR V2载体上，然后把12万个质粒混合起来，形成CRISPR/Cas9 基因敲除质粒文库。并且我们将此文库整合到了细胞中，一个125cm²细胞培养瓶中含有约10⁸个细胞，每个细胞被敲除了一个基因，共约2万个基因被敲除，所以含有每个特定基因缺陷的细胞约有5000个（10⁸/2万）。客户拿到细胞后，可进行传代。
二、参数
靶基因物种：人
靶基因数目：19,050
gRNA数目： 123,411
细胞类型：胃癌、乳腺癌、结肠癌等癌细胞系和永生化的细胞系。
价格：7万元/株
三、应用
【应用举例：细胞凋亡相关基因筛选】
取细胞文库进行扩增，然后平均分成两份，每一份包含10⁸个细胞，每个细胞被敲除了一个基因，共约2万个基因被敲除，所以含有每个特定基因缺陷的细胞约有5000个（10⁸/2万）。向其中一份细胞中加入放线菌素D、诱导细胞凋亡（A组），在另一份细胞中加入溶剂、作为对照（B组）。A组用流式细胞仪筛选出凋亡细胞A1、未凋亡细胞A2，B组用流式细胞仪筛选出凋亡细胞B1、未凋亡细胞B2。分别对A1、A2、B1、B2进行短测序，检测哪些基因被敲除了。A2中被敲除的基因具有抗凋亡作用，B1中被敲除的基因具有促进凋亡的作用。其它应用：
（1）新药靶点确定与验证
（2）环状RNA上游调控机制分析
（3）Long noncoding RNA作用机制验证
（4）脂肪代谢机制研究
（5）干细胞自我更新、不对称性分裂机制等。