4×预混型快速逆转录试剂盒

产品名称：4×预混型快速逆转录试剂盒

产品用途：适用于长片段 RNA（如 mRNA、LncRNA 等）的逆转录反应，反应产物cDNA 主要用于 PCR、qPCR 等反应。 

产品描述：

本试剂盒为包含去除基因组DNA的高效DNase的快速逆转录试剂盒，主要包含两种试剂：1) gDNA Remover试剂中包含浓缩的DNase及buffer；2) 4×RT Master Mix试剂中包含逆转录所需的所有成分（逆转录酶、buffer、RNase Inhibitor、dNTPs、Oligo dT18、Random Hexamer等）。

本试剂盒采用的DNase及buffer反应系统经过特殊优化，仅需室温（19~27℃）反应5 min，就能降解95%以上的基因组DNA，极大地降低了残留基因组对结果的干扰。

本试剂盒采用的新型M-MLV突变体逆转录酶具有很强的抗干扰能力及扩增能力，15 min得到的扩增产物量可以达到AMV逆转录酶大约1 h的产物量。后续逆转录产物建议用于PCR、qPCR，不建议用于基因克隆。

产品组成：

产品优势：

专注于外泌体提取和配套试剂盒研发；

性价比高，为您的研究开展节省成本；

数百篇参考文献让您放心使用无忧购；

质控数据：

产品使用：

1、 使用前将gDNA Remover、4×RT Master Mix从冰箱中取出，上下颠倒5~10次使之充分混匀，然后使用离心机短暂离心将管壁上附着的液体甩下来，置于冰上待用。

去除基因组DNA反应：

2、 用gDNA Remover处理RNA：取100 ng~2 μg的总RNA（一般建议使用1 μg的总RNA），加入2 μL gDNA Remover，加ddH₂O补足10 μL，用移液器轻柔吹打10次左右使之充分混匀，使用离心机短暂离心至管底，然后室温（19~27℃）反应5 min，反应结束后置于冰上待用（如需使RNA二级结构变性，可将RNA在65℃下孵育5  min，然后迅速冰上冷却）。

逆转录反应：

3、 上述步骤反应结束后，按照如下体系配制逆转录反应体系，即向上述gDNA Remover处理过的总RNA中，加入5 μL的4×RT Master Mix，然后加入ddH₂O补足至20 μL：

4、 按上表加好试剂后，必须用移液器轻柔吹打10次左右使之充分混匀（注：混匀时建议将移液器刻度调到18 μL左右），然后使用离心机短暂离心至管底。

5、 逆转录反应条件：42℃反应15 min，95℃反应30秒；逆转录反应结束后得到的产物即为cDNA。

6、 逆转录反应得到的cDNA可直接作为模板进行qPCR反应，或者稀释5~10倍后再使用（具体的稀释倍数根据基因表达丰度来确定）。在20 μL的qPCR反应体系中：如果模板cDNA稀释10倍，建议使用5 μL的cDNA（2~8 μL）。如不立即进行qPCR实验，建议将cDNA冻存于-80℃冰箱中。

常见的注意事项、操作要点及优化方法：

1、 实验开始前首先验证qPCR引物是否适用，主要观察扩增曲线与熔解曲线；

2、 引物验证后应分装冻存，防止污染或降解；

3、 RNA的质量及cDNA的质量对qPCR的结果具有很大的影响，应尽量保证RNA不降解。RNA提取后应尽快进行逆转录反应，避免反复冻融，或者多次逆转录反应。如果预计使用量较大，可以一次多逆转录几管cDNA。如果条件允许，cDNA建议保存在-80℃冰箱。

经典案例：