BeyoNGS™人线粒体DNA突变检测试剂盒(For Ill

碧云天生产的BeyoNGS™人线粒体DNA突变检测试剂盒(For Illumina)，即BeyoNGS™ Human mtDNA Mutation Detection Kit (For Illumina)，是一种用于人类线粒体DNA (Human mitochondrial DNA, hmtDNA)全基因长度进行基因分型检测的高通量测序文库构建试剂盒。本试剂盒通过多重PCR反应对人线粒体DNA全序列进行扩增和富集，并使用BeyoNGS™ Bidirect Amp Dual-Index Primers (For Illumina)为每个DNA样品添加双端标签，从而稳定、高效地获得适用于Illumina测序平台的mtDNA扩增子测序文库，最终获得全长人线粒体DNA的突变信息。

线粒体是细胞的能量工厂，是细胞内氧化还原反应的主要场所，其结构和功能异常可导致多种疾病的发生[1]。每个线粒体含有约2-10个拷贝的mtDNA，通常位于内膜附近或基质中。mtDNA呈双链环状，通常全长16,569bp，分为调控区和编码区。调控区是线粒体DNA的高突变率区；编码区共编码37个基因，包括13种多肽链、22种tRNA和2种rRNA[2]。mtDNA编码的蛋白的主要功能是调控氧化磷酸化和蛋白质的组装，线粒体DNA突变是其结构和功能异常的主要原因[3]。

线粒体突变所导致的疾病被称为线粒体遗传病(Mitochondrial genetic disorders)，其发生率约为万分之二。目前，已发现人类100多种疾病与线粒体基因突变有关，如Leber遗传性视神经病、mtDNA突变与氨基糖苷类抗生素致聋(又称“一针致聋”)、MELAS综合征、MERRF综合征、Kearns-Sayre综合征等[4]。线粒体遗传病呈现“母系遗传效应”及“阈值效应”[5]。

线粒体突变检测可辅助线粒体遗传病的早期诊断，可明确病症，对病人良好预后十分重要；此外，线粒体突变检测可以有效预防“一针致聋”的发生。因此人线粒体DNA突变检测及其研究非常重要。

本试剂盒包含了用于线粒体突变检测的多重PCR扩增的引物和试剂、用于去除多余引物的Primer Cleanup Mix，以及对每个样品进行标签PCR反应所需相关试剂。本试剂盒的工作原理如图1所示。带有通用标签的目标区域扩增引物与线粒体基因组DNA结合，通过多重PCR反应对线粒体基因组DNA进行全序列多片段扩增，同一样品的扩增产物混合后经Primer Cleanup Mix酶解、1:100倍稀释，再使用BeyoNGS™ Bidirect Amp Dual-Index Primers (For Illumina)标签引物进行第二轮正链和负链的标签扩增反应给样品添加上测序标签，最后经磁珠纯化后完成测序文库构建。

图1. BeyoNGS™人线粒体DNA突变检测试剂盒(For Illumina) (D9501)的建库流程图。

本试剂盒不含用于添加文库标签的PCR引物，推荐选购碧云天生产的BeyoNGS™ Bidirect Amp Dual-Index Primers (For Illumina) (D9037)。

Primer Cleanup Mix的主要有效成分为单链核酸外切酶，用于酶解去除PCR反应后多余的引物，降低多余引物对第二次PCR的负面影响。

本试剂盒适用于包括血液、唾液或其它组织来源的基因组DNA，但只适用于点突变及20bp以内的缺失插入突变(微小突变)。

BeyoNGS™人线粒体DNA突变检测试剂盒(For Illumina)分为不同大小的2种包装，具有384孔PCR仪的用户，可分别用于8个和96个样品的mtDNA全长扩增子测序文库的构建。对于使用PCR管或96孔PCR体系的用户，建议将第一次多重PCR反应体积增加一倍至10μl，可有效降低因体积损耗所导致的扩增失败率。

-20ºC保存，至少一年有效。

需自备的试剂与材料：BeyoNGS™ Bidirect Amp Dual-Index Primers (For Illumina) (D9037)、BeyoMag™ DNA片段分选磁珠(D0038/D0039)、无水乙醇、BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)、磁分离架(BeyoMag™磁分离架系列产品)、96/384孔PCR仪、96孔或384孔PCR板(FTUB333/FTUB384/FTUB335/FTUB337/FTUB339)、耐高温PCR封板膜(FSF002/FSF030/FSF035/FSF039)。

Multiplex PCR Mix、Primer Cleanup Mix和Index PCR Master Mix含有易失活的酶，使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。