Rosetta(DE3) 大肠杆菌表达感受态细胞

Rosetta(DE3) 大肠杆菌表达感受态细胞产品信息：组成         BC204-01                       BC204-02  Rosetta(DE3) Competent                      10×100µl                        20×100µlcells pUC19（0.1ng/µl）              5µl                        5µl储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。产品介绍：本公司生产的Rosetta(DE3)感受态细胞是采用大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107 cfu/µg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。基因型：F-ompThsdSB(rB- mB-)galdcmlacY1(DE3)pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL)(Camr )抗生素耐药性：细胞具有氯霉素抗性。产品特点：该菌株是携带氯霉素抗性质粒 BL21 的衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的 6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA,CUA,CCC, GGA)对应的 tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：提示感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。（一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。）以下实验以 100μl 感受态细胞为例。2. 向感受态细胞悬液中加入目的 DNA ，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。3. 将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要摇动离心管。（此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8 分钟左右；如果室温较低，可延长时间至 8-15 分钟左右。条件允许建议使用 42℃热激方法。）4. 向每个离心管中加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ ，150rpm，摇床振荡培养 60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。5. 无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。（涂布用量可根据具体实验来调整。转化质粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；连接产物的转化菌液建议离心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。相关试剂及培养基的制备方法：1. LB 液体培养基：称取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的去离子水，完全溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0。加去离子水定容至 1L。分装后，121℃高压灭菌 20 分钟。2. SOB 和 SOC 培养基：称取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 烧杯中加入约 800ml 的去离子水，完全溶解后再补加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（约 0.2ml）调 pH 至 7.0。加入去离子水将培养基定容至 1L。121℃灭菌 20 分钟。使用时加入 5ml 灭菌的 2M MgCl2 溶液（此种培养基称为 SOB）。再补加经 0.22µm 过滤除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此种培养基为 SOC）。3. 转化复苏细菌用的液体 LB 培养基或 SOC 培养基：可以一次高压 50ml 液体培养基，无菌状态按 1ml每管分装于高压灭菌的 1.5ml 离心管中，装于自封袋中，冻存于-20℃中，每次用一支。可以极大地避免培养基污染和减少劳动量。4. LB 固体选择培养基：100ml LB 液体培养基中加入 1.5g 琼脂粉，摇匀后，121℃高压灭菌 20 分钟。冷却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素（如 AMP 浓度通常为 100µg/ml），混匀后倒在细菌用的无菌培养皿中，等琼脂凝固后即可使用。5. IPTG：称量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 灭菌水，浓度为 200mmol/L。用无菌 0.22μm过滤膜过滤除菌。小份分装后，-20℃保存。 

E 、感受态细胞
E-1 、大肠杆菌克隆感受态细胞
货号	产品名称	规格	单位
BC101-01	TOP10 感受态细胞	100μl ×10	包
BC101-02		100μl ×20	包
BC102-01	DH5α 感受态细胞	100μl ×10	包
BC102-02	DH5α 感受态细胞	100μl ×20	包
BC103-01	JM109 感受态细胞	100μl ×10	包
BC103-02		100μl ×20	包
BC104-01	XL1-Blue 感受态细胞	100μl ×10	包
BC104-02		100μl ×20	包
BC105-01	Mach 1-T1 感受态细胞	100μl ×10	包
BC105-02		100μl ×20	包
BC117-01	Turbo 感受态细胞	100ul ×10	包
BC117-02		100ul ×20	包
BC118-01	Stable 感受态细胞	100ul ×20	包
BC106-01	DH10B 感受态细胞	100μl ×10	包
BC106-02		100μl ×20	包
BC107-01	OmniMAX2-T1 感受态细胞	100μl ×10	包
BC107-02		100μl ×20	包
BC108-01	Stbl3 感受态细胞	100μl ×20	包
BC115-01	Stbl4 感受态细胞	100μl ×20	包
BC109-01	XL10-Gold 感受态细胞	100μl ×20	包
BC110-01	JM110 感受态细胞	100μl ×20	包
BC111-01	DB3. 1 感受态细胞	100μl ×20	包
BC112-01	DH10BAC 感受态细胞	100μl ×20	包
BC113-01	NEB 10-beta 感受态细胞	100μl ×20	包
BC114-01	BJ5183-AD- 1 感受态细胞	100μl ×20	包
E-2 、大肠杆菌表达感受态细胞
货号	产品名称	规格	单位
BC201-01	BL21(DE3) 感受态细胞	100μl ×10	包
BC201-02		100μl ×20	包
BC202-01	BL21(DE3) pLysS 感受态细胞	100μl ×10	包
BC202-02		100μl ×20	包
BC203-01	M15 感受态细胞	100μl ×10	包
BC203-02		100μl ×20	包
BC204-01	Rosetta(DE3) 感受态细胞	100μl ×10	包
BC204-02		100μl ×20	包
BC205-01	OrigamiB(DE3) 感受态细胞	100μl ×10	包
BC205-02		100ul ×20	包
BC206-01	T7 表达感受态细胞	100μl ×10	包
BC206-02		100μl ×20	包
BC207-01	T7pLysY 感受态细胞	100μl ×10	包
BC207-02		100μl ×20	包
BC208-01	Shuffle T7-K12 感受态细胞	100μl ×10	包
BC208-02		100μl ×20	包
BC209-01	Shuffle T7-B 感受态细胞	100μl ×10	包
BC209-02		100μl ×20	包
E-3 大肠杆菌电转感受态细胞
货号	产品名称	规格	单位
BC401-01	NEB 10-beta 电转感受态细胞	50μl ×20	包
BC402-01	BJ5183 电转感受态细胞	50μl ×20	包
BC403-01	BJ5183-AD- 1 电转感受态细胞	50μl ×20	包
BC404-01	TOP10 电转感受态细胞	50μl ×20	包
BC405-01	DH5α  电转感受态细胞	50μl ×20	包
E-4 农杆菌感受态细胞
货号	产品名称	规格	单位
BC301-01	LBA4404 农杆菌感受态细胞	100ul ×20	包
BC302-01	AGL1 农杆菌感受态细胞	100ul ×20	包
BC303-01	EHA105 农杆菌感受态细胞	100ul ×20	包
BC304-01	GV3101 农杆菌感受态细胞	100ul ×20	包
E-5 、农杆菌电转感受态细胞
货号	产品名称	规格	单位
BC305-01	LBA4404 农杆菌电转感受态细胞	50μl ×20	包
BC306-01	AGL1 农杆菌电转感受电转态细胞	50μl ×20	包
BC307-01	EHA105 农杆菌电转感受态细胞	50μl ×20	包
BC308-01	GV3101 农杆菌电转感受态细胞	50μl ×20	包