Bradford法蛋白定量试剂盒

Bradford法蛋白定量试剂盒
Bradford Protein Assay Kit

货号：PD-Cog-1000
组分：1000毫升染色液一瓶，5 mg/ml BSA四支。
保存：4度避光，密封保存，一年有效。

Bradford蛋白定量法的核心原理建立在考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质分子之间的特异性相互作用上。这种相互作用引发染料分子结构的显著改变，进而产生可测量的颜色变化。在酸性条件下，游离状态的考马斯亮蓝G-250呈现红褐色，其最大吸收峰位于465nm波长处。然而当染料与蛋白质结合时，会发生一系列复杂的分子构象变化。

染料分子主要通过其磺酸基团与蛋白质中的碱性氨基酸残基（特别是精氨酸和赖氨酸的带正电荷侧链）形成静电相互作用。同时，染料分子中的芳香环系统与蛋白质的疏水区域（如色氨酸和酪氨酸的吲哚环和苯环）产生疏水相互作用。这种双重结合机制导致染料分子的电子云分布发生重排，使其最大吸收峰位移至595nm，溶液颜色也随之转变为蓝色。

这种颜色变化的程度与溶液中蛋白质的浓度直接相关。在适当的浓度范围内，595nm处的吸光度与蛋白质浓度呈现良好的线性关系。值得注意的是，不同蛋白质由于氨基酸组成（特别是精氨酸和赖氨酸含量）的差异，可能表现出不同的显色效率。因此在实际应用中，通常选择与研究样本组成相近的标准蛋白（如牛血清白蛋白BSA）来建立标准曲线。

Bradford法的独特优势在于其快速响应特性。染料-蛋白质复合物在室温下2-5分钟内即可达到稳定的显色状态，且该复合物可维持稳定约1小时。这种方法对大多数常见的缓冲液成分（如Tris、EDTA等）具有较好的耐受性，但对强变性剂（如SDS）和还原剂（如DTT）较为敏感，这些物质可能干扰染料与蛋白质的正常结合。

本试剂盒对BSA的检测灵敏度可达到0.15 µg，检测浓度上限可达到5 mg/ml以上，主要受读数所用仪器的检测范围限制。不同蛋白由于氨基酸组成不同，与染料结合后的吸光值有差异，线性范围会有所变动。由于染料与蛋白结合前后的吸收光谱有重叠，因此直接使用OD595（在595 nm的光吸收值）线性拟合，得到的是一个直径很大的曲线，可近似看作直线，在蛋白的浓度跨度较大时，线性度下降。使用OD595/OD470的比值（在595 nm和470 nm的光吸收值之比）能更好地拟合反应过程，得到的是一条直线，可在一定程度上提高检测灵敏度。

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