去垢剂兼容型Bradford试剂盒
Detergent-Compatible Bradford Assay Kit
保存:4度避光,一年有效。-20度冷冻可长期保存。
货号:PD-Cde-1000
组分:1000毫升染色液一瓶,5 mg/ml BSA四支。
1. Bradford法的基本原理
Bradford法是一种基于考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后颜色变化的经典蛋白质定量方法。在酸性条件下,考马斯亮蓝G-250以单体形式存在,呈现红色(最大吸收峰约465 nm);当与蛋白质的疏水区域结合后,染料聚合成蓝色复合物(最大吸收峰移至595 nm),吸光值与蛋白质浓度呈正相关。反应在5分钟内完成,无需加热或长时间孵育,可检测低至0.1–0.5 μg/mL的蛋白质。
2. 传统Bradford法的局限性
尽管Bradford法广泛使用,但其对某些实验条件敏感,尤其是去垢剂的存在会显著干扰检测结果,例如:
SDS等阴离子去垢剂:与染料竞争结合蛋白质,降低显色效率。
Triton X-100、NP-40等非离子去垢剂:可能引起溶液浑浊或光散射,导致吸光值异常。
高浓度去垢剂(如>1% SDS):直接破坏染料-蛋白质复合物的稳定性。
结果偏差:传统Bradford试剂在含去垢剂的样品中,吸光值可能显著降低或不可预测。
3. 去垢剂兼容型Bradford试剂盒的技术改进
本试剂盒通过抗干扰配方设计,实现了对多种去垢剂的高耐受性。
支持595 nm和450 nm双波长检测,通过差值法消除背景干扰。
4. 技术优势
兼容多种去垢剂,包括:6% SDS、4% Tween20、2% Triton-X100、2% NP40、8% CHAPS,可耐受各种RIPA裂解液,对蛋白组学实验常用的各种缓冲液均可兼容。
应用场景:适用于细胞裂解液、组织匀浆液、病毒裂解液等含去垢剂的样本。
操作流程:仅需5分钟完成显色,支持96孔板检测,适配自动化工作站。
试剂稳定性:避光保存有效期长达12个月,可反复冻融。
5. 技术局限性
不适用于强还原环境:如含高浓度DTT(>1 mM)或β-巯基乙醇的样品可能干扰显色。
光散射干扰:若样品浑浊度极高(如未离心的细胞碎片),需离心后取上清检测。
染料稳定性:长期暴露于光照或高温可能导致试剂失效。
6. 总结
去垢剂兼容型Bradford试剂盒通过优化配方,解决了传统方法在含去垢剂样本中的检测难题,同时保持了快速、灵敏的核心优势,其技术改进使其成为蛋白质组学研究、生物制药及基础实验室中处理复杂样本的理想选择。
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