Language
产品信息
产品实验流程
| 以HEK293细胞为例： 1.转染前，确保细胞存活率大于95%，活细胞密度在(1.5~2.0)×106 cells/mL之间； 2.将活细胞密度稀释至1.05×106 cells/mL； 3.将pDNA和1 mg/mL Bestop™PEI线性转染试剂颠倒数次，混匀； 4.每毫升待转染培养物转1 μg pDNA到一个干净的小瓶中。用新鲜培养基稀释至20 μg/mL（5%最终培养体积）。 5.每毫升待转染培养物转3 μL 1 mg/mL Bestop™PEI线性转染试剂至干净的小瓶中。用培养基稀释至60 μg/mL(5%最终培养体积)。 6.将稀释的pDNA和Bestop™PEI线性转染试剂混合。颠倒几次，在室温下静置10分钟。使用前将密封的容器轻轻颠倒一次。 7.每90 mL培养基转染10 mL pDNA/PEI混合物。在混合的同时逐渐将混合物加入到培养基中，孵育细胞。 8.转染后：如果使用增强剂或补充剂，可以在转染后6小时的任何时间添加。传代培养也可以在6小时后进行。 如果使用GFP对照，48小时后应观察到转染率超过70%。对于优化过的方法，80%以上的转染率是合理的。 ·特别提醒：初次使用PEI进行转染时，请先优化出适合自己实验的最佳DNA和PEI比例。 |
