DIG EASY HYB GRANULES

产品描述 General description 方便的酶和核苷酸混合物：切口平移利用DNA酶和DNA聚合酶的组合来切割DNA螺旋的一条链，然后在聚合酶检查或“校对”切口位点时掺入标记的核苷酸。大质粒、粘粒和PCR片段都常用于该方法，同时DNA可以是线性化或超螺旋的。单个模板在标准的90分钟反应中可产生一致的结果，并且生成的平均探针长度为200个碱基对，最多为500个碱基对。调节DIG-11-dUTP与dTTP的摩尔比以确保在新合成的DNA中每第20个 到第25个 核苷酸能被DIG修饰。DNA中这一半抗原的密度可在免疫检测反应中产生最高的灵敏度。 默克生命科学致力于为您带来更加绿色的替代产品，这些产品遵守一项或多项绿色化学12项原则。该产品为一种安全的化学品。 DIG系统是一种灵敏且高性价比的替代方案，可用于核酸的放射性标记和检测。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。 Specificity 热灭活：通过加入1 μl 0.5M EDTA（pH8.0),并加热至65℃10分钟来终止反应。 Application 用于生成高灵敏度的 -11-dUTP标记的原位杂交探针。[1][2][3][4] 注意：该混合物也可用于过滤杂交技术，但是，对于高灵敏度的过滤杂交探针，我们建议您使用Roche Applied Science的DIG-High Prime。 对于使用其他半抗原和荧光团的非放射性标记原位探针，Roche Applied Science提供了Biotin-切口平移混合物和切口平移混合物（无核苷酸）。 Quality 在点斑点检测中进行功能测试。 Principle 切口平移法基于DNase I在MgCl2存在下可以低酶浓度将随机分布的切口引入DNA的能力。 大肠杆菌 DNA聚合酶I使用切口的3′-OH末端作为引物，以5′→3′方向合成与完整链互补的DNA。DNA聚合酶I的5′→3′核酸外切活性可同时去除合成方向上的核苷酸。聚合酶活性可依次利用同位素标记的或半抗原标记的脱氧核糖核苷三磷酸对去除的核苷酸进行替换。在低温（+15℃）下，反应中未标记的DNA因此被新合成的标记DNA所取代。 Preparation Note 1小瓶溶于50％甘油（v / v）中的5倍浓缩稳定反应缓冲液，以及DNA聚合酶I、DNase I、0.25mM dATP、0.25mM dCTP、0.25mM dGTP、0.17mM dTTP和0.08mM DIG-11-dUTP（碱稳定）。 检测时间：100分钟 样品材料：超螺旋和线性化的质粒DNA、超螺旋和线性化的粘粒DNA、纯化的PCR产物。 注意：不需要在切口平移之前对模板进行变性。 Other Notes 仅用于生命科学研究。不可用于诊断。