CX005L Annexin V-EGFP/PI凋亡检测试剂

Annexin V-EGFP/PI凋亡检测试剂盒
Annexin V-EGFP / PI Apoptosis Detection Kit
本产品冰袋运输；避光保存于4℃，保质期12个月。

货号规格
goodCX005SL   120次
goodCX005SL   150次
goodCX005LS   100次

产品简介
good细胞凋亡(Apoptosis)是最常见的细胞死亡方式之一，其受到基因的严格调控。细胞凋亡过程常伴随着明显的细胞形态学变化，比如，细胞凋亡早期，质膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)会翻转到细胞质膜表面；而在凋亡的中后期，随着细胞质膜的通透性的增大，一些较大分子的化合物，如碘化丙啶(Propidium Iodide，PI，一种DNA结合染料)，便可自由扩散进入细胞，将细胞核染上红色荧光。
goodAnnexin V( 膜联蛋白 -V) 是一种分子量为 35~36 kDa 的 Ca²⁺ 依赖性磷脂结合蛋白，能与磷脂酰丝氨酸高亲和力特异性结合。本试剂盒采用与绿色荧光蛋白 (EGFP) 融合的 Annexin V 作为检测磷脂酰丝氨酸的探针，配合碘化丙啶 (PI)，通过使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备，可以快速检测细胞凋亡。Annexin V-EGFP 凋亡检测试剂盒对细胞群进行染色后，早期凋亡细胞显示绿色荧光，晚期凋亡细胞及坏死细胞显示红色和绿色荧光，活细胞几乎没有荧光。

产品内容
 

组分	CX005S	CX005	CX005L
Annexin V-EGFP	100 µL	250 µL	500 µL
碘化丙啶(PI)	200 µL	500 µL	1 mL
结合缓冲液(10×)	10 mL	25 mL	50 mL

注意事项

good1. 如进行流式检测，建议使用 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒 (货号：CX006) ,实验结果会更理想，如使用本产品进行流式检测，需按以下操作： good1. 流式检测需设置三个对照样品来校准： good1.   空白管：仅用 结合缓冲液 重悬的细胞，以评估自身荧光水平，并相应地调整仪器；
good1.   单染管：分别用 Annexin V-EGFP或碘化丙啶(PI)染色，以确定每个细胞群体的边界； good1. 流式细胞仪检测时，使用 FITC 通道(通常是FL1)检测 Annexin V-EGFP；phycoerythrin通道(通常是FL2)检测PI。用 CellQuest 等软件进行分析，以 EGFP 为横坐标，PI 为纵坐标，绘制双色散点图(two-color dot plot)；
good2. 如使用含EDTA的胰酶消化细胞时，有必要在染色之前用PBS或 结合缓冲液 洗涤细胞两次以去除EDTA，从而避免螯合Annexin V所必需的Ca²⁺；
good3. 建议细胞在染色后1 h之内完成检测；
good4. 实验操作过程需尽量轻柔，从而最大限度地保留凋亡的细胞；
good5. 试剂在开盖前请短暂离心，将管盖及内壁上的液体甩至管底，以避免开盖时液体洒落；
good6. Annexin V-EGFP和PI是光敏物质，在操作时请注意避光；
good7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
good8. 本产品仅限科研使用。

操作步骤
  good◆ 对于悬浮细胞
good1. 用无菌去离子水将 结合缓冲液 (10×) 稀释成 1× 结合缓冲液；
good2. 离心收集细胞 (500~1,000 × g，5 min)； good3. 加入预冷的 PBS(pH 7.4) 轻轻重悬细胞，用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次； good4. 用 1× 结合缓冲液重悬细胞，使细胞浓度达到 1×10⁶ cells/mL；
good5. 吸取 100 μL 细胞悬液 ( 细胞总数为 1×10⁵ cells) 至一新 EP 管中，加入 5 μL Annexin V-EGFP 和5~10 μL 碘化丙啶 (PI)，轻轻混匀，室温避光孵育 10~15 min； good6. 染色孵育后，每管加入 800 μL 1× 结合缓冲液，轻轻混匀，离心 (500 × g，5 min)，去上清； good7. 向管中加入 100 μL 或合适上样体积的 1× 结合缓冲液，轻轻重悬细胞，即可涂片后在荧光显微镜下进行观察，或立即进行流式细胞仪检测。
good◆ 对于贴壁细胞
good1. 用无菌去离子水将 结合缓冲液 (10×) 稀释成 1× 结合缓冲液；
good2. 首先将细胞培养液吸出至一新离心管内，接着用预冷的 PBS(pH 7.4) 轻柔地洗涤贴壁细胞一次，加入适量胰酶细胞消化液 ( 不含 EDTA )，室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞脱落下来即可，吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化，以免造成假阳性； good3. 在细胞中加入上一步骤收集的细胞培养液，稍混匀，转移至离心管内，离心 (500~1,000 × g，5 min)，弃上清，收集细胞；
good◆gg注意 : 加入步骤 1 中的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶；残留的胰酶会消化并降解后续加入的Annexin V-EGFP 导致染色失败。
good4. 加入预冷的 PBS(pH 7.4) 轻轻重悬细胞，用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次； good5. 用 1× 结合缓冲液重悬细胞，使细胞浓度达到 1×10⁶ cells/mL；
good6. 吸取 100 μL 细胞悬液 ( 细胞总数为 1×10⁵ cells) 至一新 EP 管中，加入 5 μL Annexin V-EGFP 和5~10 μL 碘化丙啶 (PI)，轻轻混匀，室温避光孵育 10~15 min； good7. 染色孵育后，每管加入 800 μL 1× 结合缓冲液，轻轻混匀，离心 (500 × g，5 min)，去上清； good8. 向管中加入 100 μL 或合适上样体积的 1× 结合缓冲液，轻轻重悬细胞，即可涂片后在荧光显微镜下进行观察，或立即进行流式细胞仪检测。