1. 柱平衡步骤：向吸附柱ZTS中 (吸附柱放入50 ml收集管中) 加入2.5 ml Buffer BL，8,000 rpm (～8,228×g)离心2 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。(用平衡液处理过的柱子最好立即使用)。

2. 取100 ml（根据培养菌体的浓度选择合适的量，低拷贝推荐用200 ml）过夜培养的菌液加入离心管，室温8,000 rpm (～8,228×g)离心3 min收集细菌，尽量吸除上清。

3. 尽量吸除上清，为确保上清液全部吸取，请用干净的吸水纸吸去瓶壁上的水滴。

4. 向留有菌体沉淀的离心管中加入8 ml Buffer P1 (请先检查是否已加入RNase A)，使用涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

5. 向离心管中加入8 ml Buffer P2，立即温和地上下翻转8次，使菌体充分裂解，室温放置5 min。

6. 向离心管中加入8 ml Buffer P4，立即温和地上下翻转8次，充分混匀，至溶液出现白色分散絮状沉淀，然后室温放置10 min。8,000 rpm (～8,228×g)离心5 min，将上清小心倒入过滤器GS2中，慢慢推动推柄过滤，滤液收集在干净的带刻度的50 ml离心管中（需自备）。

7. 向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇 (加入异丙醇过多容易导致RNA污染)，上下颠倒混匀后转移到吸附柱ZTS中 (吸附柱放入50 ml收集管中)。

8. 8,000 rpm (～8,228×g)离心2 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9. 向吸附柱中加入10 ml Buffer DW2 (请检查是否已加入无水乙醇)，8,000 rpm(～8,228×g)离心2 min，弃掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

10. 重复操作步骤9。

11. 8,000 rpm (～8,228×g)离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇，打开盖子室温晾干3-5 min。

12. 将吸附柱置于一个干净的50 ml收集管中，打开盖子室温晾干5 min，向吸附膜中间部位悬空滴加1-2 ml Buffer EB (Buffer EB需在65℃水浴中预热3-5 min)，室温放置5 min，然后8,000 rpm (～8,228×g)离心2 min。将50 ml离心管中洗脱液全部转入一个干净的1.5 ml离心管，-20℃保存。

可选步骤（如果需要更高浓度的质粒，可进行如下操作）

1. 每1 ml洗脱液加入1.42 ml异丙醇以及0.42 ml 5M NaCl (客户自备)，混匀，室温放置5 min，8,000 rpm离心10 min，小心弃上清。

2. 加入0.5 ml的70%乙醇洗涤沉淀，室温8,000 rpm离心5 min，小心弃乙醇。

3. 重复操作步骤2。

4. 空气中干燥沉淀约5-10 min，根据需要用适当体积的Buffer EB溶解沉淀。