DNase活性荧光定量检测试剂盒

脱氧核糖核酸酶（Deoxyribonuclease，DNase）指通过水解DNA磷酸二酯键催化生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酶，根据其性质的不同可分为两个家族：DNase I和DNase II家族。其中，DNase I是最为常见的一种核酸酶，广泛存在于实验环境和生物物体中，例如实验台面、移液器、以及实验人员的皮肤表面等。由于核酸酶能够降解核酸，因此微量的核酸酶存在都会对许多实验造成干扰。因此，实验人员常常需要对研究样品中的DNase含量进行检测。文献中常见的检测DNase的方法通常耗时长，并且检测灵敏度比较低。

本试剂盒采用荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer，FRET）法，利用荧光标记的探针为底物，来定量检测样本中的DNase含量。探针是一种合成的DNA寡核苷酸探针，其5’端具有HEX荧光基团（Fluorophore）又称供体（Donor），3’端具有BHQ1淬灭基团（Quencher）又称受体（Acceptor）。
 

产品信息

产品描述	货号	规格
DNase活性荧光定量检测试剂盒	KT6004	96孔

试剂盒组分

组分	组分名称	规格	数量
1	DNase I (1U/μL)	30 μL/管	1
2	DNase Substrate	10 nM	1
3	10×Reaction Buffer for DNase	1 mL/管	2
4	Nuclease-free Water	10 mL/瓶	1
5	1×TE Buffer (pH 8.0)	1.5 mL/管	1

储存条件

1、本试剂盒需干冰运输
2、到货后，所有试剂-30~-15℃保存，使用时分装，避免反复冻融

质量评估

本试剂盒相关产品已通过底物稳定性试验、残留定性试验、精密度试验、准确度试验、专属性试验、检测限、定量、线性和批次间稳定性。

注意事项

1. 本试剂盒检测的是体系中整体的DNase残留，除了可以检测DNase I，也适用于Exonuclease Ⅲ，Bal31 nuclease，微球菌核酸酶（micrococcal nuclease），全能核酸酶（Benzonase nuclease），绿豆核酸酶（mung bean nuclease），S1核酸酶（S1 nuclease）和T7 endonuclease的检测。
2. 本试剂盒可检测大部分的反应溶液和试剂，然而部分溶液因其pH和离子浓度与本试剂盒并不兼容，具体如下：（1）用于凝胶电泳的loading buffer和一些颜色较深的溶液；（2）抑制DNase活性的溶液，包括高离子浓度、pH<4或pH>9、促进剂、洗涤剂螯合剂等任何使得蛋白质变性的溶液；引起试剂盒化学降解的溶液，例如pH>9、强腐蚀性溶液（强酸、强碱、漂白剂等）。
3. 为了确定检测样本的兼容性，用标准的操作方法检测样本。反应结束后若空白对照未出现荧光，则加入5 μL DNase I（本试剂盒自带），并重复检测荧光信号。此时若出现强的信号值，则说明溶液无干扰。
4. 本试剂盒除了检测大部分的液体样本，还可检测固体表面，例如：枪头、pH电极、玻璃颗粒以及其他固体表面的测试。检测时将固体表面浸入反应预混液中几分钟后，按照标准操作规程测试。
5. 当实验中出现假阳性时，首先排除实验耗材是否有污染，其次检查实验溶液中是否有污染或是否对DNase Substrate有降解作用，在排除实验过程中是否有操作失误引入了额外的核酸酶。
6. 当实验中出现了假阴性，检查下实验溶液是否对核酸酶有抑制成分，不合适的溶液可能会导致假阴性结果。

数据展示
​​​​​​向96孔板中每孔加入40 μL的DNase底物工作溶液，然后加入10 μL的标准品（0.0125-0.000195313U/孔），在37℃下以30 s的时间间隔进行动态检测，检测30 min，以收集实时数据。检测曲线如下：

图1. DNase活性检测实时动态图

图2. 30 min DNase标准曲线图

如有任何问题，欢迎随时与我们沟通：施女士021-34695370/13524958337（微信同号）。