KOF High-Fidelity DNA Polymera

目录号：E003-02A

 

产品描述:

 

KOF超保真DNA聚合酶是一种经过基因工程改造的高保真DNA聚合酶，具有极强的3´→5´核酸外切酶活性（Proof-reading活性），当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。与普通Pfu酶相比，保真性更高，约为普通Taq酶的80倍。其扩增性能也比普通Pfu酶高，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低的缺陷。

 

产品用途：

 

用于要求保真度高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成、DNA片段的补平等。

 

使用建议：

 

KOF超保真DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端，无3´端"A"突出，除使用NovoRec® PCR一步定向克隆试剂盒（Cat No:NR005）外，其它PCR产物的克隆方案有：。

1)PCR扩增前引物进行5´加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。

2)将扩增产物3´末端加A后再与T载体连接。

3)引物中引入15bp与载体同源序列，利用NovoRec® PCR一步定向克隆试剂盒（Cat No:NR005）直接连接到目的载体。

4)由于KOF超保真DNA聚合酶的校正活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物长度，理想引物长度为20-30bp。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入KOF超保真DNA聚合酶。

 

 

注意事项：

 

1）2mM Mg²⁺可满足绝大多数PCR扩增，对于某些PCR，为了保证较好的扩增，可调节为2-4mM。

2）体系中加入推荐的酶量，可以满足大多数PCR扩增，对于某些PCR，为了得到较好的扩增，可适当增加酶量。

 

保存温度：

 

-20℃ 

 

应用实例：

 

图例）50μl扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对0.6kb~12kb进行扩增。

泳道1：0.6kb； 泳道2：1.0kb；

泳道3：2.0kb； 泳道4：3.0kb；

泳道5：4.0kb； 泳道6：8.0kb；

泳道7：10.0kb；泳道8：12.0kb；

泳道M：1kb DNA Ladder Plus II。  

 

 

For research use only.