基质胶-标准型含酚红

基质胶-标准型无酚红
Basement Membrane Metrigel，Phenol-Red Free，LDEV-Free
品    名：基质胶-标准型无酚红，Basement Membrane Metrigel，Phenol-Red Free，LDEV-Free

来    源：小鼠肿瘤基底膜成分
保存条件：保存-80°C 冰箱，有效期 2 年。 第一次融化后按照单次用量进行分装。
 
产品简介：
基质胶是从富含胞外基质蛋白的小鼠肿瘤组织中提取的基底膜基质，其中含有层粘连蛋白、IV 胶原和 巢蛋白，其它成分还包括基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生长因子、类胰岛素生长因子、组织纤溶酶原及其他生长因子。
基质胶在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。本品适用于类器官生长、分化、代谢和毒理学研究。
 
操作方法：
一、薄胶成胶方法：
1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
2. 将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为 50μL/cm² 生长面积的基质胶。
3. 在 37℃放置 30 分钟，即可使用。
二、厚胶成胶方法：
1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
2. 将需要使用的培养板置于冰浴，将培养的细胞与基质胶混合，用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为150-200μL/cm² 生长面积的基质胶。
3. 在 37℃放置 30 分钟，可成胶。可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。
三、薄层包被方法：
1. 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
2. 根据使用需要，采用无血清培养基稀释基质胶。根据实验需要确定最佳包被浓度。
3. 将稀释的 基质胶包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。室温下孵育 1 小时。
4. 去除未结合的基质胶，用无血清培养基轻轻地冲洗。
四、iPS细胞培养
当基质胶用于iPS细胞培养，稀释比例建议为100倍稀释。操作方法如下：
1. 稀释前将基质胶放入4℃冰箱过夜融化。
2. 将适量体积的稀释液（DMEM/F12或PBS）置4℃冰箱预冷。
3. 将融化的基质胶与稀释液从冰箱中取出并打开盖子，用移液管吹吸稀释液几次以冷却移液管，并吸取少量稀释液加入基质胶管中混匀，将基质胶转移到稀释液中，并吹打混匀。（因为基质胶遇15℃以上温度就会成凝胶粘在原装玻璃壁和移液管壁上，故基质胶从冰箱拿出来以后尽快打开盖子并转移到预冷的稀释液中，吸取基质胶的移液管一定要冷却）。
4. 立即用稀释后的基质胶包被培养板或培养皿。对于6孔板，每个孔使用1mL稀释后的基质胶，对于6cm的培养皿，每个孔使用2mL稀释后的基质胶，晃动培养板使基质胶溶液均匀的分布在表面上。
5. 使用前，包被的培养板应放在培养箱（37℃）下至少1h。请勿让培养板脱水。在培养板可供使用之前，请勿移除基质胶溶液。
注意：
1）如果不立即使用，培养板必须密封，以防止脱水。包被后的培养板可在2-8℃下最多储存7天。
2）如果基质胶溶液并未完全覆盖表面，则无法实验最佳的细胞培养，因此，不建议使用含有溶液已蒸发区域的培养板。
3）如果已将培养板在2-8℃下储存，则在移除基质胶溶液之前，将培养板在培养箱（37℃）里放置30min。
 
五、类器官药敏实验
1.将扩增好足够量的肿瘤类器官用4°C预冷的基础培养基进行重悬，缓慢机械吹打，或者通过TryplE酶消化获得单细胞悬液。
2.离心收集类器官细胞。
3.加入基质胶原液，与细胞进行混匀。
4.将细胞与基质胶的混合物，加入37°C预热过的96孔板（或者384孔板），立即将孔板放入培养箱。
5.大约10min后，基质胶将凝固，加入相应体积的类器官培养液进行培养。
6.类器官形成后（如果是机械吹打，类器官将在传代24h后就会形成；如果是酶消化，类器官会在3-5天后形成），每个孔分别加入不同种类、不同浓度的待筛选的抗肿瘤药物。
7.根据需要选择合适的方法测定肿瘤类器官对各种药物的敏感性。
 
注意事项：
1、基质胶在温度高于10°C时就会开始凝固成胶，所以尽量在冰上操作基质胶。在操作过程中，所有接触基质胶的细胞培养器皿，移液吸头，分装管等都必须预冷后使用。如需分装，整包装基质胶只能分装一次，在分装前，最好先把基质胶插在冰上，然后放入4℃冰箱并过夜，且分装用的枪头、EP管等都要提前-20℃预冷，整个分装过程都需在冰上进行，且以后每次试验时拿出本次用量所需的基质胶。
2、类器官传代时，如果为了避免酶对类器官造成影响，可直接用4°C预冷的基础培养基对基质胶进行缓慢吹打，即可将类器官从基质胶中释放出来。
3、溶解时可将基质胶置于 4℃冰箱内冰上过夜溶解。成胶后的基质胶可以在 4℃ 24-48 小时后重新呈液态。