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DNA凝胶回收试剂盒
目录号
GE706-200
一盒两用，可有效回收80 bp~10 kb 双链DNA片段，也可直接回收PCR原液，凝胶无需称重，操作简便，回收率高达85%。
产品组成
| 组分 | 规格（200次） |
| Buffer BL | 55 mL |
| Buffer GN（黄色） | 110 mL |
| Buffer W1 | 2×72 mL |
| Elution Buffer | 25 mL |
| 吸附柱EC | 200套 |
保存条件
常温（10~25℃）保存12个月。
产品简介
本试剂盒适用于从琼脂糖凝胶中回收多至10 μg DNA（80 bp~10 kb），回收率可达65~85%。琼脂糖凝胶在高离序盐中（Buffer GN）溶解后，DNA片段选择性吸附于离心柱内的硅基质膜上。回收后的DNA纯度高，并能保持片段完整性和高生物学活性，可直接用于测序、连接、PCR扩增、体外转录等分子生物学实验。
产品特点
- 快速：胶块无需称重，操作简便；
- 高效：回收效率高，获得的目的DNA纯度高；
- 适用性广：一盒两用，可用于DNA片段凝胶回收及PCR产物直接回收等。
适用范围
本品适用于PCR产物直接回收、DNA片段的凝胶回收、酶切产物的凝胶回收等。
注意事项
- Buffer W1使用前加入指定量的无水乙醇，各溶液使用后请及时将盖子拧紧；
- 若回收凝胶中的DNA片段，电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果；
- 建议使用高质量的琼脂糖，以免其中杂质影响下游连接等实验；
- Buffer GN中含刺激性溶液，操作时要戴乳胶手套和眼镜；
- 回收产物可通过琼脂糖电泳或分光光度计检测是否回收成功。使用分光光度计时，若使用Elution Buffer进行洗脱，建议使用Elution Buffer进行校准。
使用方法
- PCR产物直接回收
- 按照PCR原液：Buffer GN=1：3的比例加入Buffer GN（不少于150 μL）后吸打混匀（如：在1.5 mL离心管中，50 μL PCR原液加入150 μL Buffer GN后吹打混匀）；
- 从琼脂糖凝胶中回收
- （可选）将吸附柱EC置于收集管中，加入250 μL Buffer BL，12,000 × g离心1 min，活化硅胶膜；
- 在365 nm长波紫外灯下，用干净刀片将目的条带切下，尽量切除不含目的DNA条带，得到凝胶体积越小越好（切胶时，为避免紫外照射时间过长对DNA造成损伤，建议快速切胶）；
- 将含有目的DNA条带的凝胶放入2 mL离心管中，加入500 μL的Buffer GN（若胶块过大，适当添加Buffer GN至溶液呈淡黄色）；
- 65℃水浴4~6 min，每2~3 min上下颠倒混匀一次至凝胶完全融化，溶液呈淡黄色；
- 将溶液转入吸附柱EC中，12,000 ×g离心1 min，弃废液，将吸附柱EC放回空收集管；
- 在吸附柱EC中加入700 μL Buffer W1（请先检查是否已加入指定体积的无水乙醇），12,000 ×g离心1 min，弃废液；
- 重复步骤6一次；
- 将吸附柱EC放回空收集管中，12,000 ×g离心2 min；
- 取出吸附柱，置于干净的1.5 mL离心管中，20~25℃开盖静置2 min，在吸附膜的中间部位加35~50 μL Elution Buffer（60~65℃预热Elution Buffer效果更好），20~25℃放置2 min，12,000 ×g离心2 min。如需较多量DNA，可将得到的溶液重新转入吸附柱中，离心2 min。
常见问题与解决办法
Q1：DNA回收率低 ？
A1：
- 琼脂糖凝胶未完全溶化。尽可能切除不含目的片段的琼脂糖，溶胶时多次上下颠倒使凝胶充分溶化，确保无固体琼脂糖残留；
- 试剂准备有误。Buffer W1需按照瓶身标示加入指定体积的无水乙醇；
- 洗脱效率低。将Elution Buffer预热至60~65℃，并进行二次洗脱。
Q2：纯化后的DNA下游结果不理想？
A2：
- 盐离子残留。确保用Buffer W1洗脱两次，此外沿吸附柱管壁四周加入Buffer W1，或加入Buffer W1后颠倒混匀2 ~3次有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐离子；
- 琼脂糖残留。尽可能切除不含目的片段的琼脂糖，多次上下颠倒使凝胶充分溶化，确保无固体琼脂糖残留。
