Reverse Transcriptase Assay 逆转

WHO规定生物制品中不能含有逆转录病毒污染，逆转录病毒种类繁多，故一般通过检测逆转录酶活性来间接检测逆转录病毒存在与否。药典规定的检测逆转录酶的方法是PERT法（Product-Enhanced Reverse Transcription），其原理是用待测样品代替逆转录酶进行RT-PCR，通过标准品制备的标准曲线计算出样品中是否存在逆转录酶以及其浓度，进而推算出样本是否含有逆转录病毒及其浓度。PERT法根据酶活性检测，普适性广，可检测出oncovirus、lentivirus和spumavirus等几大类已知和未知的逆转录病毒。但常规PERT法是两步法RT-PCR加电泳检测，操作繁琐，误差大，不适合高通量操作。为克服此缺点，本公司开发了一管式实时PERT试剂盒。它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供待测样品。

2. 操作简单快捷，一步加样操作，变异系数小，适合高通量操作。

3. 实时荧光检测，一管式反应，避免样本交差污染。

4. 灵敏性高，最低可以检测到几十个逆转录酶分子的活性。

5. 背景低，本产品所用的DNA聚合酶不含背景逆转录酶活性，使用的RNA模板在生命周期中无DNA环节，不会自带污染源。

6. 起始样本可以是细胞培养上清液、细胞裂解液和纯化的逆转录酶溶液，可以检测到里面所含有的逆转录酶活性，并由此判断是否有逆转录病毒的存在。

7. 含逆转录酶阳性对照，便于制备标准曲线和排除假阴性实验。

8. 定量检测的线性范围至少为6个数量级。

9. 本产品足够50次20 μL体系的PERT反应。

10.本产品只能用于科研，包括生物制品和细胞库等质检环节。