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2× Lightning Taq PCR Master Mix(含染料)
目录号:71800
产品内容
产品成份 | 71800-05 | 71800-0100 |
2× Lightning Taq PCR Master Mix | 5x 1ml | 100x 1ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
本产品包含Lightning Taq DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×，扩增速度（5-10s/kb）是普通Taq mix速度的6倍，保真度是Taq酶的3倍， 适用于扩增各种小于6Kb的DNA模板！PCR产物3’端带A头，纯化后可直接用于TA载体克隆（Cat#42114-20）。
本产品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、测序等后续操作。
产品特点
1. 高产：产量是普通 Taq 酶的 2 倍！
2. 高效：延伸速度 5-10s/kb，一般 0.5 小时完成 PCR！
3. 高成功率：对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果！
2 × Lightning Taq PCR Master Mix 使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | FinalConcentration |
2× LightningTaqPCRMix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required |
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ddH2O | up to 20 μ | up to 50 μ |
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参考模板用量（50 μl 反应体系）：
质粒：0.1-10 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：50-150 ng；cDNA：1-5 μl 。
二、建议 PCR 循环条件：
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94℃ | 3 minutes |
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Denaturation | 94℃ | 10 seconds | 25-35 cycles |
Annealing | 55℃ | 10 seconds | |
Extension | 72℃ | 10 seconds / kb | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes |
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| 4-8℃ | Hold |
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注意事项：
a. 片段≥3kb 或产量较低时，可以采用 15-20 秒/kb 的延伸速度或采用较多循环数。
b. 对于高 GC 含量或者有二级结构的模板，应该适当延长预变性时间到 5 分钟，变性时间可以适当提高 5-10 秒。扩增效果不佳时，还可加入 DMSO 到终浓度 1-8%。
