无缝克隆 Mix

产品信息 Products

产品名称	产品编号	规格
Hi-Efficienct Cloning Mix	YMM-02250V	50 Rxn（250 μl）

产品描述 Product overview
基于重组原理的无缝克隆技术，作为新一代的克隆方法，不依赖繁琐的酶切、连接步骤，也不需要末端补平等操作，依据DNA片段与线性化载体末端的15~25 nt同源序列的重组，可将插入片段克隆至任意线性载体的任意位点，载体自连背景极低，是一种简单、快速、高效的DNA定向克隆技术。
Hi-Efficienct Cloning Mix为2×重组Mix，一次反应可完成单至多个DNA片段的重组，最快仅需5分钟即可完成单片段重组，且阳性率高于95%。Cloning Mix中添加的辅助因子，有效提高克隆阳性率，经优化的反应体系，能够一定程度上耐受未纯化PCR产物中含有的杂质，在克隆阳性率与兼容性方面有着优异的表现。
运输与保存方法 Transportation and preservation methods
  冰袋运输；-20℃保存，有效期2年；建议第一次使用时分装冻存，避免反复冻融。
注意事项 Matters need attention
1.单次完成多个插入片段或者重组质粒的长度较长时，推荐使用高效率感受态细胞进行重组产物转化；
2.若使用未纯化的PCR扩增产物进行重组反应时，加样体积不应超过2 μl (总反应体积的20%) ；
3.以质粒为模板进行插入片段PCR扩增时，若后续使用DpnI消化处理，应在反应完成后失活 DpnI，以免降解重组载体。
常见问题 Frequently asked question

问题描述	原因	解决方法
转化效率低	感受态效率低下	使用新制备或妥善保存的感受态细胞。
	DNA片段比例不佳	按照说明书推荐的最适用量和比例配制反应体系。载体和插入片段的浓度测定：若线性化载体与插入片段已经过纯化，且经电泳检测条带单一或无Smear残留时，可使用超微量核酸蛋白检测仪等基于分光光度法的仪器进行浓度测定，当A260/A280在1.8~2.0之间时浓度值可信；若线性化载体与插入片段未经过纯化，也可使用琼脂糖电泳测定样品浓度。
	DNA片段纯度不够	对载体和插入片段进行胶回收纯化。由EDTA等金属离子鳌合剂会抑制无缝克隆反应，因此纯化产物应溶解于ddH2O中，切勿使用Tris-EDTA等缓冲液。
	反应产物过量	在转化体系中，无缝克隆反应产物体积不应超过感受态细胞体积的10%
大量克隆不 含插入片段	载体线性化不完全	载体线性化反应时，提高快速内切酶的使用量，延长反应时间，或使用胶回收纯化酶切产物。
	相同抗性质粒污染	以质粒为模板进行插入片段PCR扩增时，使用预线性化质粒作为扩增模板，使用DpnI等甲基化敏感型内切酶对扩增产物进行处理，或对产物进行胶回收纯化。
	平板抗性不足	确保使用正确的抗生素，并使用新鲜制备的抗生素平板。
大量克隆 含有不正确 插入片段	非特异性PCR扩增产物	优化PCR体系，提高特异性，或胶回收纯化PCR产物重叠序列的扩增引物。