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| 甘油三酯(Triglyceride，TG)又称三酰甘油，是3分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人体内含量最多的脂类，大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成，用酶学方法测定 TG 是生化检测中的常用方法， 其特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。 本公司甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP 单试剂微板法)又称磷酸甘油氧化酶法或磷酸甘油氧化酶-过氧化物酶偶联法等，其原理是甘油三脂被 LPL 水解为甘油和脂肪酸，后者经甘油激酶和 ATP 磷酸化，G-3-P 被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使 4-氨基安替比林与酚(三者合称 PAP)反应，生成红色benhun醌亚胺(Trinder 反应)，酶标仪在 500~520nm 处进行比色测定，用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的甘油三脂含量定量测定。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。 |
| 名称 | 规格 | 储存 | |
| 试剂(A): GPO-PAP工作液 | Good's Buffer | 30mL | -20℃ 避光 |
| LPL、GK、GPO | |||
| 过氧化物酶(POD) | |||
| 4-氨基安替比林 | |||
| 对氯酚 | |||
| 试剂(B): Glycerol 标准(1.7mmol/L) | 1mL | 4℃ 避光 | |
| 试剂(C): ddH2O | 1mL | RT | |
自备材料:
| 1、生理盐水或PBS。 |
| 2、96 孔板或离心管、小试管。 |
| 3、水浴锅或恒温箱。 |
| 4、酶标仪或分光光度计。 |
| 5、全自动或半自动生化分析仪。 |
操作步骤(仅供参考)：
| 一、样本处理 | |||
| 1、血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。 | |||
| 2、细胞样本 | |||
| a:取适量的细胞(一般推荐＞106以上)，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。 | |||
| b:.用 PBS 或生理盐水清洗 1-2 次，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。 | |||
| c:加入200-300μl 的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3-5s，间隔30s,重复3-5次；亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心；亦可用1-2% Triton X-100 冰浴 30-60min，制备好的裂解液不可离心。 | |||
| 3、组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(mL)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆，2500-3000g 离心10min，取上清待用。 | |||
| 二、酶标仪TG测定操作: | |||
| 1：按下表依次加入试剂： | |||
| 加入物(μL) | 空白孔 | 标准孔 | 待测孔 |
| ddH2O | 3 | - | - |
| Glycerol 标准(1.7mmol/L) | - | 3 | - |
| 待测样本 | - | - | 3 |
| GPO-PAP 工作液 | 300 | 300 | 300 |
| 2：充分混匀, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3：酶标仪测定 500-520nm 吸光度，以空白孔调零，读取标准孔和各待测孔的吸光度。 | |||
| 三、分光光度计(1ml 比色杯)、半自动生化分析仪 TG 测定操作： | |||
| 1、按下表依次加入试剂： | |||
| 加入物(mL) | 空白管 | 标准管 | 待测管 |
| ddH2O | 0.01 | - | - |
| Glycerol 标准(1.7mmol/L) | - | 0.01 | - |
| 待测样本 | - | - | 0.01 |
| GPO-PAP 工作液 | 1 | 1 | 1 |
| 2、充分混匀, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、分光光度计测定500-520nm吸光度，空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 | |||
| 四、普通分光光度计(2mL比色杯)TG 测定操作: | |||
| 1、按下表依次加入试剂： | |||
| 加入物(mL) | 空白管 | 标准管 | 待测管 |
| ddH2O | 0.02 | - | - |
| Glycerol 标准(1.7mmol/L) | - | 0.02 | - |
| 待测样本 | - | - | 0.02 |
| GPO-PAP 工作液 | 2 | 2 | 2 |
| 2、充分混匀, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、分光光度计测定500-520nm吸光度，空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 | |||
| 五、全自动生化分析仪 TG 测定操作: | |||
| 1、按下表依次加入试剂： | |||
| 加入物((μL) | 空白管 | 标准管 | 待测管 |
| ddH2O | 3 | - | - |
| Glycerol 标准(1.7mmol/L) | - | 3 | - |
| 待测样本 | - | - | 3 |
| GPO-PAP 工作液 | 300 | 300 | 300 |
| 2、充分混匀, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、全自动生化分析仪测定 500-520nm 波长处吸光度，以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 | |||
机器参数：
| 主波长/次波长 | 500/600nm |
| 反应类型 | 终点法 |
| 反应方向 | 升反应(+) |
计算公式：
| 血清、血浆等液体样本(空白调零)： |
| TG(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×1.7mmol/L |
| 血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)： |
| TGmmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×1.7mmol/L |
| 细胞、组织等样本(空白调零)： |
| TG(mmol/L)=｛ ( 待 测 管 吸 光 度 - 空 白 吸 光 度 )/( 标 准 管 吸 光 度 -空 白 吸 光 度 ) ｝×1.7mmol/L÷待测样本浓度(mg/mL) |
| 细胞、组织等样本(全自动生化分析仪)： |
| TG(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×1.7mmol/L÷待测样本浓度(mg/mL) |
参考区间：
| 健康成年人： |
| 理想范围：＜1.7mmol/L(＜150mg/dl) |
| 边缘升高：＜1.7-2.25mmol/L(150-199mg/dl) |
| 升高：＜2.26-5.64mmol/L(200-499mg/dl) |
| 很高：≥565mmol/L(≥500mg/dl) |
性能指标：
| 外观 | 无色至淡黄色澄清液体 |
| 线性范围 | 0.05-9.0mmol/L(4~790mg/dl)，R2>0.98 |
| 灵敏度 | 检测下限 0.05mmol/L(4mg/dl) |
| 变异系数 | 批内<5%，批间<8%，总误差<10% |
| 空白吸光值 | <0.2(1cm 光径) |
| 干扰因素 | 胆红素<205μmol/L；血红蛋白<6g/L；EDTA、肝素抗凝时，对结果无明显影响。 |
| 稳定性 | 密闭，6个月 |
注意事项：
| 1、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。 |
| 2、本法可直接用于检测脑脊液中的TG含量，但不能直接检测尿液中的TG含量，因为未经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应。 |
| 3、待测样本如不能及时测定，应置于2-8℃保存，3天内稳定。 |
| 4、本法线性范围可达9.0mmol/L，如果样本TG浓度过高，结果可能呈假性降低，应用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。 |
| 有效期： | -20℃ 避光， 6个月有效。 |
