pUCm-T载体

pUCm-T载体

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编号	载体名称
北京派瑞金VECT76509	pUCm-T载体

pUCm-T载体基本信息：

pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。

pUCm-T载体的主要信息如下：
Basepairs 2773
Lac Z promoter 142-171
M13/pUC Sequencing Primer 204-221
LacZ 222-534
Multiple cloning region 233-376
M13/pUC Reverse Primer 378-395
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region 972-1832
ColE1 origin of replication(rep) 1987-2606

pUCm-T载体图谱：

pUCm-T载体的多克隆位点的详细序列如下(请特别注意其中的Pst I不是单酶切位点)：

201 ACACAGGAAA CAGCTATGAC CATGATTACG CCAAGCTTGC ATGCCTGCAG
TGTGTCCTTT GTCGATACTG GTACTAATGC GGTTCGAACG TACGGACGTC
Xba I Xho I BamH I Bgl II
251 GTCGACTCTA GACTCGAGGG ATCCAGATCT CCAGTCTT GA CCTGGTCTGC
CAGCTGAGAT CTGAGCTCCC TAGGTCTAGA GGTCAGA TCT GGACCAGACG
Pst INot I Nco I EcoR V Cla I Nde I T7 promoter
301 AGGCGGCCGC CCATGGGATA TCATCGATCA TATGTCGCCC TATAGTGAGT
TCCGCCGGCG GGTACCCTAT AGTAGCTAGT ATACAGCGGG ATATCACTCA
Kpn I Sac I EcoR I
351 CGTATTACGG TACCGAGCTC GAATTCACTG GCCGTCGTTT TACAACGTCG
GCATAATGCC ATGGCTCGAG CTTAAGTGAC CGGCAGCAAA ATGTTGCAGC

pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
Afl II Age I Apa I Asc I Avr II Bbs I Bbv II Bcl I
Blp I BsaA I BseR I Bsg I BsiC I BsiW I Bsm I BsmF I
Bsp120 I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I BstB I BstE II BstX I
Bsu36 I Dra III Eco47 III Eco72 I Esp I Fse I Hpa I Mlu I
Msc I Mun I Nae I NgoM I Nhe I Nru I Nsi I PflM I
Pme I Pml I PpuM I PspA I Rsr II Sac II Sfi I Sma I
SnaB I Spe I Spl I Srf I Stu I Xca I Xma I

pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：

HinD III A`AGCT,T 234 BspM I ACCTGC 10/14 239 Sph I G,CATG`C 244 Sal I G`TCGA,C 252 Acc I GT`MK,AC 253 HinC II GTY|RAC 254 Hind II GTY|RAC 254 Xba I T`CTAG,A 258 Ava I C`YCGR,G 264 PaeR7 I C`TCGA,G 264 Xho I C`TCGA,G 264 BamH I G`GATC,C 270 BsaB I GATNN|NNATC 275 Bgl II A`GATC,T 276 Xcm I CCANNNN,N`NNNNTGG 289 Tth111 I GACN`N,NGTC 293 Not I GC`GGCC,GC 305 Eag I C`GGCC,G 305 Xma III C`GGCC,G 305 Dsa I C`CRYG,G 312 Nco I C`CATG,G 312 Sty I C`CWWG,G 312 EcoR V GAT|ATC 320 Cla I AT`CG,AT 325

Acc65 I G`GTAC,C 360 Asp718 G`GTAC,C 360 Kpn I G,GTAC`C 364 Ban II G,RGCY`C 370 Sac I G,AGCT`C 370 Apo I R`AATT,Y 372 EcoR I G`AATT,C 372 Kas I G`GCGC,C 533 Nar I GG`CG,CC 534 Ehe I GGC|GCC 535 Bbe I G,GCGC`C 537 EcoO109 I RG`GNC,CY 780 Aat II G,ACGT`C 841 Ssp I AAT|ATT 955 Xmn I GAANN|NNTTC 1160 Bsp1286 I G,DGCH`C 1177 Sca I AGT|ACT 1279 EcoN I CCTNN`N,NNAGG 1399 Cfr10 I R`CCGG,Y 1675 Bsa I GGTCTC 7/11 1694 Ahd I GACNN,N`NNGTC 1760 AlwN I CAG,NNN`CTG 2239 Afl III A`CRYG,T 2648 Sap I GCTCTTC 8/11 2765

pUCm-T载体的全序列信息：

pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number M77789)。
少量自连的载体转化得到的克隆由于编码了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色。大部分重组的载体，由于插入片段破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上转化得到白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆。
pUCm-T载体和PCR产物片段进行连接，转化后在IPTG/X-Gal平板的上长出的克隆，其中白色克隆代表PCR产物片段可能插入到pUCm-T载体中，但后续还需要酶切、PCR或者测序确认。
对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。
一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。

pUCm-T载体保存条件： -20℃保存。

pUCm-T载体注意事项：

DNA聚合酶是否可以在PCR产物3’端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3’端加A的反应，再用T载体进行克隆。
进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。