简单的操作流程
60秒内即可完成自动细胞计数
Cellometer K2通过明场和荧光成像以及图像识别软件迅速准确地计数细胞，并自动计算和显示细胞数、浓度、直径和存活率%。
60 秒内完成上样、图片查看、细胞计数、生成报告。K2可以让用户：
- 增加通量
- 提高准确性
- 提高结果一致性
- 确保正确获取所有数据
- 分析不易计数的细胞（易成团，形状不规则等）
- 消除判断错误、误数和使用者之间的差异
原代细胞分析：PBMCs, 肝细胞和其他
Cellometer K2专为原代样本分析而设计，适用样本包括外周血、脐带血、骨髓，以及其他复杂样本：
- 移植用有核细胞
- 免疫研究中的PBMCs
- 疫苗开发中的脾细胞
- 细胞治疗中的干细胞
- 肿瘤研究中的肿瘤悬液
通过将活的和死的有核细胞染上不同荧光，排除细胞碎片、血小板和红细胞的干扰，K2可精确计算细胞存活率。基于对“复杂”和“干净”样本的精确分析，K2可胜任在细胞处理的多个阶段（细胞收集 – 分离 – 冻存）对细胞状态进行评估。
Cellometer K2可用于分析多种细胞类型，包括：
双荧光染色法计数活/死有核细胞
为什么用双荧光染色法？
仅凭明场下的细胞形态有核和无核细胞难以被区分，而且台盼蓝染色也没有荧光染色对活死细胞的判断灵敏，所以我们强烈建议用双荧光染色法来精确分析原代细胞。K2细胞计数仪预设了多种用AO/PI双荧光染色法来分析原代细胞的应用。
AO/PI染色法
吖啶橙(AO)是一种核酸染料，可以渗透活细胞和死细胞，将所有有核细胞染色并发出绿色荧光。碘化丙啶(PI)只能渗透破损的细胞膜，将所有有核的死细胞染色并发出红色荧光。当细胞被AO和PI同时染色时，由于这两种染料间的荧光共振能量转移(FRET)，所有活的有核细胞会发出绿色荧光，所有死的有核细胞会发出红色荧光。不含核的细胞或杂质不发荧光。
细胞实验：细胞周期、凋亡和GFP
Cellometer K2可以完成多种细胞实验，比如细胞周期、凋亡和GFP蛋白表达分析。K2的数据可以导出到De Novo FCS Express流式软件进行分析和展示。
用户可以用Nexcelom Bioscience的细胞周期试剂盒对细胞进行染色并分析SubG1, G0/G1, S和G2/M等期所占的比例。用户也可以用Nexcelom Bioscience的Annexin V-FITC/PI和Caspase 3/8试剂盒来分析凋亡细胞的比例。K2还可以分析表达GFP的细胞所占的比例。
排除红细胞、血小板或细胞碎片的干扰
AO和PI均是核酸染料。因为大部分成熟的哺乳动物红细胞没有细胞核，所以只有活的和死的有核细胞才会被染色发出荧光。该方法不需裂解红细胞，能帮助用户节省时间和减少实验步骤。红细胞、血小板和细胞碎片都会在计数时被排除。
荧光染色法计数原代细胞的优势
右边的细胞图片显示了荧光染色法计数原代细胞的优势。明场图片显示了该样本中的有核细胞以及混杂的红细胞和血小板。不过在红色和绿色荧光通道中我们只能看到有核的活/死细胞。
细胞图像可用于数据确认
没有完全相同的两个细胞
用户可通过K2的明场通道查看细胞的形态。
被圈定的细胞图片可用于确认图片的获取和分析是否正确。明场图片可用于普通细胞计数和台盼蓝存活率分析。
被圈定的荧光图片显示被计数的有核活/死细胞，可用于确认原代细胞的分析是否准确。
用户可确认：- 基于大小和形态判断细胞计数是否准确
- 成团细胞计数是否精确
- 红细胞、血小板、碎片是否被排除
明场图片可用于确认粘连的细胞是否都被计数以及碎片是否被排除。在荧光图片中，被计数的活细胞用绿圈标出，被计数的死细胞用红圈标出。
- 细胞图片可被保存和导出并用作文献发表和演示
- 保存的图片可以用默认或自定义参数重新分析
Cellometer分析原代肝细胞的方法
因为肝细胞的形态不均一、脆弱、易成团，用血球计数板人工计数肝细胞耗费精力且不准确。而且肝细胞的存活率下降很快，如果计数时间太长会导致结果的不准确和不一致。除此以外，肝细胞的质地很脆弱，不能承受鞘液的压力，所以也不适合用流式细胞仪分析。因此，Cellometer图像细胞仪是肝细胞分析的最佳仪器。
双荧光染色步骤
分析存活率时，将20 µl肝细胞样本和20 µl Cellometer AO/PI染料混合。吖啶橙(AO)与DNA结合发出绿色荧光，将肝细胞和碎片区分开。碘化丙啶(PI)只能渗透破损的细胞膜，和死细胞的DNA结合发出红色荧光。当细胞同时被AO和PI染色时，由于FRET (荧光共振能量转移)效应，死细胞中AO发出的绿色荧光被PI吸收，所以死的肝细胞发出红色荧光，活的肝细胞发出绿色荧光。这个染色过程简单、快速，结果准确。
Cellomter分析
和染料混合后立即将20 µl染色的样本加入Cellometer细胞计数板并插入Cellometer K2计数仪，仪器会对板中的细胞自动拍照并计数。因为计数板是一次性的，所以不需清洗，也降低了交叉污染的风险。用户可用预设的原代肝细胞参数分析样本。
成团细胞和形状不规则细胞的分析
NCI-60 细胞系和成团的MCF-7细胞
NCI-60是美国国立卫生研究院(NIH)为药物筛选开发出的59株(原本60株)细胞系。
- NCI-60系列中有57%的细胞系易成团，含有碎片，或形状和大小有较大差异
- 所有59株NCI-60细胞系都在Cellometer细胞计数仪上验证过
美国国立癌症研究院(NCI)的所有40所癌症中心都在使用Cellometer细胞计数仪
细胞大小分析和基于大小的细胞计数
Cellometer K2细胞计数仪会基于细胞直径自动生成细胞大小直方图。
因为Cellometer可生成单个细胞大小的测量结果，所以可将多个样本叠加在一个直方图上，以便分析细胞直径随时间的变化。
比人工计数快10倍
使用血球计数板人工计数1 x 106个细胞需要花费大约5分钟的时间。同时计数活细胞和死细胞所需时间会在此基础上加倍。Cellometer Auto 2000可以在30秒内得到活细胞和死细胞的数目和浓度以及存活率百分比。
提高数据准确性和一致性
- 省略清洗步骤
- 减少判断错误
- 排除红细胞的干扰
- 避免记录和计算错误
- 减少计数时间，提高工作效率
Cellomter准确性
Cellometer K2拥有优越的可重复性，荧光计数和分析结果的CV%都在10%以内。右边数据显示的是用PI染色后的Jurkat细胞的计数和存活率结果。一次性计数板：无需清洗、无污染
Cellometer一次性细胞计数板由两个厚度一定的小室组成，利用标准的单通道移液器将20 µl细胞悬液注入小室内，再将细胞计数板插入到Cellometer计数仪后板内的细胞即可以直接被拍照显示。
一次性细胞计数板的优点：
- 节省时间 – 无需清洗
- 无交叉污染的风险
- 降低了对用户的生物危害风险
- 样品体积可控
- 针对大细胞有更深更宽的计数板
- 最为实惠的自动细胞计数仪耗材
专业的在线和现场技术应用支持
经验丰富的Nexcelom技术支持专家可在北京时间上午9点至下午5点提供电话和在线支持，并可协助： - 创建新的细胞类型
- 计数参数的优化
- 故障排除
- 培训新用户
- Cellometer K2新仪器装机
- 软件功能和说明书
- 在线教程和培训视频
- 提交技术支持申请
所有的Nexcelom应用科学家都100％专注于基于成像原理的细胞计数方法和实验应用。
Nexcelom应用科学家可以支持：
- 现场演示
- 培训
- 故障排除
- 技术研讨会
文献引用情况：
1、Development and Evaluation of a TaqMan Real-Time PCR Assay for the Rapid Detection of Cross-Contamination of RD (Human) and L20B (Mouse) Cell Lines Used in Poliovirus Surveillance
