人血小板生成素(TPO)酶联免疫吸附测定 试剂盒

背景介绍

血小板生成素（Thrombopoietin，TPO）又称巨核细胞生长发育因子（MGDF）、MPL配体及巨核细胞集落刺激因子(MK-CSF)等，是由TPO基因编码的蛋白质。血小板生成素主要由肝细胞和骨髓基质细胞分泌，刺激巨核细胞的产生和分化，调节血小板的产生，在巨核细胞的发育过程中起着关键作用。人的TPO蛋白前体N端为21个氨基酸残基组成的信号肽，经水解后形成332个氨基酸残基组成的成熟TPO蛋白，分子量约为38kD。不同物种的氨基酸残基具有较明显的保守性，人TPO与大鼠、小鼠和狗TPO的同源性分别为75%、73%和 76%。在人类和小鼠细胞上发现TPO具有一定的跨物种生物活性。血清中游离 TPO 浓度主要通过黏附因子表达在人外周血血小板和巨核细胞上的c-mpl 来调节。

预期用途

该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中血小板生成素(TPO)的浓度。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA法。将抗人血小板生成素（TPO）抗体包被在酶标板上，实验时加入梯度稀释的标准品或待检测的样本后，标准品或样本中的人TPO会与酶标板上的包被抗体结合，后加入生物素化抗人TPO抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素结合形成免疫复合物，洗去游离成分后，加入显色底物（TMB），若反应孔中含有人TPO，则TMB会在HRP催化下生成蓝色物质，加入终止液后会变成黄色。利用酶标仪在450nm处测定反应孔中溶液的吸光度（OD₄₅₀），TPO浓度与OD₄₅₀值成正比，通过绘制标准曲线便可计算出样本中人TPO的浓度。

产品性能指标

实验步骤

结果判断

1. 计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在双对数坐标轴上拟合四参数逻辑函数的标准曲线。

2. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

注意事项

1. 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。

2. 试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，   

请按国家生物试验室安全防护条例执行。

3. 刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何 

影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按照试剂盒推荐条件保存。

4. 请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。未用完的浓

缩生物素化抗体(100×)、浓缩HRP酶结合物(100×)、酶标板及其他原液按照试剂盒推荐条件保存。

5. 检测使用的酶标仪需要安装能检测450±2nm波长的滤光片，光密度范围在0-3.5之间。 

建议使用时提前15分钟预热。

6. 请勿使用其他批号或其他来源的试剂混合或替代本试剂盒中的试剂。

7. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用。

8. 请勿使用过期的试剂。